刘冰花,罗亚雄,曾玉桂,谢小英,饶 停,陈 娟,张艳萍
(成都大学医护学院,四川成都 610106)
目前,酶广泛应用于医药、生物燃料、传统酿造、食品加工、纺织、造纸、皮革及有机合成等领域,酶的提取和合成已成为科研人员重要的研究课题[1-3].酶可以从动植物体内提取,但由于酶在生物体内的含量很低,并且从动植物体内提取酶的成本较高,在工业上目前主要通过微生物发酵的方法生产酶.黏细菌(myxcobacteria)是产子实体的滑行细菌,属于原核生物,具有复杂的社会行为和生活周期[4].同时,黏细菌可产生丰富的次级代谢物,是人们获得大量天然药物和酶的重要来源[5].本研究拟从黏细菌中寻找具有工业价值的酶类.
实验所用黏细菌菌株来自成都地区并由本实验室分离并保藏,菌株编号分别为,CL-1、CL-3、CL-5、CH-1、CH-2、CC-1、CY-1、CX-1、CL-7和CM-2.
(1)VY/4培养基[6].安琪酵母0.25%,CaCl2· 2H2O 0.1%,维生素 B120.5 μg·mL-1,琼脂粉1.50%,pH值7.2.
(2)纤维素酶活性鉴别培养基.微晶纤维素0.5%,安琪酵母0.2%,K2HPO4·3H2O 0.15%, KH2PO40.1%,NaCl 0.05%,无水CaCl20.01%,维生素B120.5 μg·mL-1,琼脂粉1.5%,pH值7.2.
(3)淀粉酶活性鉴别培养基.可溶性淀粉0.5%,安琪酵母0.2%,K2HPO4·3H2O 0.15%,KH2PO40.1%,NaCl 0.05%,无水CaCl20.01%,维生素B120.5 μg·mL-1,琼脂粉1.5%,pH值7.2.
(4)蛋白酶活性鉴别培养基.酪蛋白0.25%,K2HPO4·3H2O 0.15%,KH2PO40.1%,NaCl 0.05%,无水CaCl20.01%,维生素B120.5 μg·mL-1,琼脂粉1.5%,pH值7.2.
(5)壳聚糖酶活性鉴别培养基.A液,壳聚糖1.0%,pH值7.2.B液,安琪酵母0.4%,K2HPO4· 3H2O 0.30%,KH2PO40.2%,NaCl 0.10%,无水CaCl20.02%,琼脂粉3.0%,pH值7.2.A液、B液分别于121℃灭菌20 min,待A液、B液冷却至50℃左右时进行1∶1混合,同时加入维生素B12至0.5 μg·mL-1.
(6)脂肪酶活性鉴别培养基.Tween 80 1.0%,安琪酵母0.2%,K2HPO4·3H2O 0.15%,KH2PO40.1%,NaCl 0.05%,无水CaCl20.01%,维生素B120.5 μg·mL-1,琼脂粉1.5%,pH值7.2.
将10株黏细菌菌株分别接种于纤维素酶活性鉴别培养基平板上,30℃恒温保……