高强度聚焦超声制备DC瘤苗及其对BALB/c小鼠肿瘤治疗作用的实验研究*

杨 雪 叶 欣 刘丽霞 葛忠民 陈祥明 田瑞华

(1.泰山医学院附属泰山医院肿瘤内科，山东 泰安 271000，2.山东省省立医院，山东 济南 250001，3. 义马矿务局总医院，河南 义马，472000)

树突状细胞(DC)是体内最强的抗原提呈细胞，捕获抗原提呈给 T、B 淋巴细胞从而参与细胞免疫和T细胞依赖的体液免疫反应,在抗肿瘤免疫应答中起关键作用。肿瘤患者体内由于肿瘤的调变可以降低 DC 提呈功能，使淋巴细胞杀伤肿瘤的效率减弱。近年来，以DC为基础的免疫治疗作为一种主动特异性细胞免疫治疗, 通过体外抗原负载的 DC 提高抗原提呈能力，激活细胞毒 T 细胞的杀伤能力，而达到治疗肿瘤的目的。本研究用高强度聚焦超声(HIFU)制备肿瘤抗原致敏DC，然后将其回输体内，激发针对肿瘤的主动特异性细胞免疫，观察HIFU辐照法制备的DC瘤苗对BALB/c小鼠肿瘤治疗作用。

1 材料与方法

1.1试剂和仪器

小鼠重组GM-CSF、IL-4购自Promega公司，分装为10 ng/l，-80 ℃保存备用；RPMI-1640完全培养基由RPMI-1640(Hyclone公司)、10%胎牛血清(Hyclone公司)组成，4 ℃保存备用；荧光素标记的大鼠抗小鼠单抗CD11c购自PharMingen公司，4 ℃保存；流式细胞仪(FACS Calibur，BD公司)及分析软件(Cellquest, BectonDicsion公司)；普通倒置光学显微镜(Olympus IX70)及电子显微镜(JEM-1200EX)。

1.2动物及细胞株

BALB/c(H-2kd)小鼠，雄性，6～8周龄，体重18～20 g，购自山东省医科院实验动物中心[实验动物等级：SPF级，许可证号SCXK(鲁)]。标准饲料喂养，自由饮水。CT-26肿瘤细胞为BALB/c小鼠来源的结肠癌细胞。

1.3实验方法

1.3.1小鼠骨髓DC的诱导培养 小鼠骨髓DC的培养参照本实验室方法[1-2]。颈椎脱位法处死小鼠，取股骨骨髓细胞，加Tris-NH4Cl裂解红细胞，收集细胞。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基配制成1106/ml的细胞悬液，接种于6孔培养板，加GM-CSF 10 ng/ml、IL-4 1 ng/ml，每孔4 ml。……