灭蚊真菌贵阳腐霉总RNA提取方法的建立

段斯亮 于 声 苏晓庆

(柳州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室，①检验教研室 广西柳州 545006;②贵阳医学院生物学教研室)

灭蚊真菌贵阳腐霉总RNA提取方法的建立

段斯亮 于 声①苏晓庆②

(柳州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室，①检验教研室 广西柳州 545006;②贵阳医学院生物学教研室)

①目的 提取贵阳腐霉(Pythium guiyangense)的总RNA。②方法 诱导后的菌丝加入硅藻土，用液氮研磨成粉末状，在变性剂存在的条件下，用酚/氯仿/异戊醇抽提，除去DNA和蛋白质，再用醋酸钠和70%乙醇沉淀RNA，去除多糖。③结果 用该方法提取的RNA样品，经紫外分光光度计检测，OD260/OD280=1.98，OD260/OD230=2.30;1%琼脂糖凝胶电泳检测，28SrRNA带的亮度约为18SrRNA带的2倍。④结论 成功地提取了贵阳腐霉总RNA，且RNA的纯度和完整性很好，能够达到进行分子生物学领域其他操作研究的标准。

贵阳腐霉 硅藻土 RNA提取

在基因表达调控研究中，RT－PCR(逆转录多聚合酶链反应)、Northern分析、cDNA文库(含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克降群)的构建等都需要高质量的RNA，获得完整性良好的RNA已成为分子生物学各研究领域首先要解决的问题。在所有的RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。RNA酶很稳定，一般而言反应不需要辅助因子，而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起严重的后果。目前，许多RNA提取方法已建立起来，这些方法均用到RNAase(核糖核酸酶)的抑制剂如肌盐、酚、氯仿、氯化艳密度梯度离心等［1～3］，但是，仍有不少实验材料由于富含RNA酶、多糖、多酚等物质或者降解RNA及与RNA形成难溶物等方式严重干扰RNA的提取［4，5］，常常导致实验的失败。……