中药干预肝纤维化中转化生长因子-β1的作用研究

陆增生 施维群

1.浙江中医药大学第二临床医学院 (浙江杭州，310053) 2.浙江中医药大学附属第二医院肝病科

肝纤维化 (hepatic fibros，HF)是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程。从现有的肝纤维化的发生发展研究机制中我们可以知道，在肝纤维化形成的过程中，肝星状细胞 (hepatic satellite cell，HSC)的活化是肝纤维化的中心环节［1］。其中激活的HSC被认为是促进细胞外基质 (extracelluar matrix，ECM)过度沉积的主要细胞，而多种细胞因子参与了肝星状细胞的激活，其中转化生长因子-β1(trans-forming growth factor l，TGF-β1)被认为是最关键的因素之一［2，3］，其可激活HSC和调节ECM的合成和降解平衡。以干扰TGF-β1靶点的抗肝纤维化治疗己成为当今研究的热点之一。TGF-β1是一族结构相关、功能相似的活性多肽，为双硫键联结的二聚体碱性蛋白，分子量为25KD。在生理状态下，TGF-β1主要由淋巴细胞、血小板和巨噬细胞分泌;在慢性炎症或肝纤维化时，间质细胞对其表达增加，而且肝实质细胞对TGF-β1表达被启动。据研究，TGF-β1可促进HSC增殖，同时促进HSC表达和分泌I、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、细胞黏合素以及通过自分泌作用促进TGF-β1自身的表达。因此，TGF-β1在肝纤维化的发生、发展过程中起着重要的始动作用和持续激活作用。中医中药对肝纤维化的良好预防和治疗效果及低毒性反应等特点目前已引起国内外学者的广泛关注，且最近几年中药对于肝纤维化中TGF-β1的作用研究方兴未艾，综述如下。

1 单味药及有效单体干预肝纤维化中TGF-β1的研究

孙玲［4］运用豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的大鼠HSC的作用进行研究，采用动物体内给药，分离药物血清，作用于体外培养细胞的血清药理学实验方法，探讨豹皮樟总黄酮血清对TGF-β1干预的HSC-T6的活化增殖和平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin，SMA)及I、Ⅲ型胶原基因表达的影响，从细胞分子学水平探讨豹皮樟总黄酮血清抗肝纤维化的作用。发现豹皮樟总黄酮血清可有效降低TGF-β1水平。杨洁等［5］通过对柴胡、红花、川芎中药单体对CCl4造模的大鼠肝纤维化治疗作用的实验发现，生理盐水对照组、柴胡组、红花组、川芎组的 TGF-β1表达阳性率分别为 87%、21%、30%、17%。表明柴胡、红花、川芎对TGF-β1表达有明显抑制作用。樊予惠等［6］用川芎嗪对人HSC TGF-β1影响的研究中发现，川芎嗪可以显著降低TGF-β1表达阳性率。何绮微等［7］将茯苓和苦参用于CCl4造模的肝纤维化大鼠，发现茯苓和苦参显著降低了TGF-β1表达。

2 中药复方干预肝纤维化中TGF-β1的研究

2.1 动物实验研究 李丰衣等［8］用调肝理脾方对酒精性肝纤维化的研究中发现，调肝理脾方能显著下调采用“白酒-吡唑-玉米油”混合液灌胃法造模的酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1水平。陈青锋等［9］运用益气活血化瘀中药复方对二甲基亚硝胺造模建立的肝纤维化大鼠进行研究发现，益气活血化瘀中药复方有明显降低大鼠肝组织中TGF-β1水平。王丽等［10］采用腹腔注射猪血清的方法建立免疫性肝纤维化大鼠动物模型，再运用化浊解毒益气方观察对纤维化大鼠TGF-β1水平的表达，发现化浊解毒益气方可以显著下调TGF-β1水平。李丰衣等［11］用复方鳖甲软肝片对酒精性肝纤维化的研究中发现，与复方牛胎肝提取物相比，复方鳖甲软肝片能显著下调采用“白酒-吡唑-玉米油”混合液灌胃法联合高脂饮食造模的大鼠肝组织中TGF-β1水平。王卫华等［12］运用二甲基亚硝胺对大鼠进行肝纤维化造模，发现甲乙煎能下调实验性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达。谢世平等［13］用鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1mRNA表达进行研究，发现和秋水仙碱组相比，鳖甲煎丸显著抑制TGF-β1 mRNA的表达。房澍名等［14］运用拆方益肝康不同药物血清对 HSC胶原代谢及TGF-β1的影响进行研究，采用分别提取正常大鼠和CCl4造模肝纤维化大鼠益肝康及其拆方丹参小复方 (丹参、黄芪、归尾)的药物血清，作用于体外培养的HSC，探讨该方对HSC胶原代谢及TGF-β1基因与蛋白表达的影响，去探讨新的药物作用靶点及配伍意义，结果显示两种方法均可显著抑制TGF-β1的表达，益肝康优于丹参小复方。贾爱芹等［15］用清肝抑纤饮及其拆方对CCl4致肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的表达进行研究发现，清肝抑纤饮及其拆方预防用药可显著降低纤维化大鼠肝组织匀浆 TGF-β1含量。并显示清热解毒药物与凉血活血药物的配伍在方中起主要作用。潘智敏等［16］用祛痰化浊法中药复方调脂积冲剂对由CCl4复合高脂乳剂造模的脂肪肝性大鼠肝纤维化模型进行研究发现，复方调脂积冲剂对脂肪肝性肝纤维化的大鼠有显著降低TGF-β1的作用。宋星星等［17］用白酒辅以吡唑、玉米油的混合食料灌胃的方法建立大鼠酒精性肝纤维化模型，然后以五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响进行研究。研究发现，五田保肝液可抑制酒精性肝纤维化大鼠肝组织 TGF-β1的表达。吴凌康等［18］以酒精灌胃制作大鼠酒精性肝纤维化模型，然后以益气活血化痰法中药灌胃，用免疫组化法探测大鼠肝组织中TGF-β1蛋白的分布和表达强度。以动物羊血清代替一抗制作阴性对照。发现益气活血化痰法中药组大鼠TGF-β1明显低于对照组。赵建玲等［19］用中药复方制剂对日本血吸虫病肝纤维化形成的影响进行研究，发现中药对日本血吸虫鼠肝内TGF-β1有明显抑制作用。李志钢等［20］研究中药肝心宁对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏 TGF-β1及Smad3表达的影响，发现经肝心宁治疗后大鼠肝脏TGF-β1表达比模型组减弱，肝心宁同时下调Smad3的表达。

2.3 临床研究 王华等［21］从病理学及肝纤维化血清标志物角度，探讨中药强肝胶囊对慢性乙型肝炎肝纤维化患者的临床疗效中发现，强肝胶囊组和给予肝泰乐、复合维生素B溶液治疗的对照组相比，血清学显示TGF-β1的下降水平更明显。白洁等［22］用中西医结合方法治疗非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)，观察血清的TGF-β1变化，以探讨治疗NASH并抑制其发生肝纤维化、肝硬化的最佳方案，3个月后，保肝降脂汤加熊去氧胆酸组的患者TGF-β1的下降水平明显，并优于其他组。

3 结语

肝纤维化的防治是当今肝病治疗的难点之一。迄今为止，现代医学尚无较有效的治疗方法，各国科学家试图从肝纤维化的发生、发展等不同环节入手，研制抗肝纤维化药物。目前在抗肝纤维化的众多药物中，中医以其多环节、多层次及多靶点的综合作用已显现出较明显的优势，具有广阔的开发和应用前景。中药在单味药和复方制剂以干扰TGF-β1靶点的抗肝纤维化治疗中，对自身免疫性、酒精性、脂肪性、非酒精性、血吸虫性肝纤维化等在动物实验中均取得较好疗效。人体临床试验也在不断增加，在已经进行的人体临床实验的研究资料中可以知道中药在非酒精性脂肪性肝病、病毒性肝炎方面的肝纤维化的防治也有很好的疗效。但因中药多为复方，即使是单味药也含有多种不同成分，故要确切地说明中药的体内作用机制及有效作用成分就较为困难。但随着分子生物学的发展和现代检测仪器、工艺、技术的提高，为我们进一步对TGF-β1的研究和中药的药物机制研究提供了可能。目前关于中药对肝纤维化中TGF-β1的研究，大多集中在动物实验阶段，人体临床试验比较少，并且辨证论治运用也比较少，而辨证论治是中医精髓之所在。我们应在研究过程中动物实验造模时应对肝纤维化各个证型的动物模型进行完善，结合中医病因病机去造模。中药运用时应遵循辨证论治的原则。在获得确切疗效的基础上，扩大临床试验范围，结合现代科学技术，更好地解决慢性肝病患者的痛苦。

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