抗人DR5单克隆抗体诱导 Jurkat和 U937细胞凋亡的线粒体信号通路①

李淑莲 蔡 静 张舒曼 刘广超 马远方

(河南大学细胞与分子免疫学重点实验室河南大学免疫学研究所，开封475004)

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor necrosisfactorrelated apoptosisinducing ligand，TRAIL)为TNF家族的成员之一，TRAIL有5种受体，4种膜结合受体(TRAIL-R1/DR4、TRAIL-R2/DR5、TRAIL-R3/DcR1、TRAIL-R4/DcR2)和 1 种可溶性受体 OPG［1］，其中 TRAIL-R1/DR4 和 TRAIL-R2/DR5胞内段含有“死亡结构域(Death domain，DD)”［2，3］。TRAIL 与 DR4/DR5 结合后，能够激活死亡受体通路及线粒体通路诱导多种肿瘤细胞凋亡［4-6］，在临床试验中也显示出较好的抗肿瘤活性，但是肝细胞损害及一些肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗等原因，一定程度上阻碍了 TRAIL的应用［7，8］。

近年研究发现，一些抗DR4/DR5的激活型抗体能够模拟TRAIL的作用，有效诱导肿瘤细胞凋亡，并且无 TRAIL 的肝细胞毒性［9，10］。本实验室成功研制一株抗人DR5激活型抗体-mDRA-6，前期实验表明，mDRA-6与细胞膜DR5结合，能够有效激活caspase-8等死亡受体途径信号分子，诱导多种肿瘤细胞凋亡［11］，但mDRA-6诱导肿瘤细胞凋亡过程中，是否有线粒体通路信号分子的激活尚不清楚，为了更全面研究mDRA-6诱导肿瘤细胞凋亡机制，本实验在白血病细胞系Jurkat和U937细胞上，探讨mDRA-6对肿瘤细胞线粒体通路信号分子的激活改变，为其临床抗肿瘤应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1材料 鼠抗人DR5单克隆抗体mDRA-6由本实验室制备;Jurkat细胞株由美国宾夕法尼亚大学医学院陈有海教授馈赠，U937细胞购于中国医学科学院上海细胞生物研究所;RPMI Medium 1640购于Gibco公司;胎牛血清购于天津TBD公司;四氮唑蓝(MTT)、DMSO购自Sigma公司;FITC-AnnexinV/PI试剂盒购自BD公司;Western细胞裂解液购自Beyotime公司;caspase-9抑制剂 Z-LEHD-FMK及caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK购于RD公司;山羊抗人 caspase-9抗体、兔抗人 caspase-3抗体……