空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A壳聚糖佐剂疫苗对小鼠免疫原性和保护性研究①

徐岗村 杜联峰 孙万邦 王宜峰 王胜香 罗军敏 姚新生 夏 嫱 杨 瑞 余 妍

(遵义医学院珠海校区/贵州省免疫学研究生教育创新基地，珠海519041)

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni，CJ)为一类微需氧嗜热革兰阴性杆菌，是人及动物消化道共同易感菌［1］。目前，CJ感染已成为全球范围内急性胃肠炎最常见的病因之一［2］。CJ感染后，临床表现复杂多样，但主要症状为腹泻性肠炎，严重的并发症为格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome，GBS)［3，4］。由于目前对CJ的遗传学特性、毒力因子、致病作用与CJ诱发GBS的详细机理尚未完全明了，至今仍缺少有效而可行的措施来防止CJ感染后格林-巴利综合征的发生。因此，研制CJ特异性疫苗用以预防CJ感染及其相关疾病，已成为国内外学者研究的热点。基因疫苗具有可诱发较全面的免疫应答、能制备抗多种病原体的多价疫苗、兼有预防和治疗作用，且制备简单、成本较低、热稳定性好、容易储存运输等优点［5，6］。本实验采用空肠弯曲菌 DNA 疫苗pcDNA3.1(-)-peb1A结合壳聚糖对DNA的缓释作用和保护作用，以壳聚糖为佐剂制备空肠弯曲菌DNA佐剂疫苗，研究空肠弯曲菌DNA疫苗的免疫原性和保护作用。

1 材料与方法

1.1材料 质粒pcDNA3.1(-)，含有氨苄青霉素(Amp)和潮霉素(Hygromysin)抗性，全长5.4 kb，为Invitrogen公司产品。重组质粒 pcDNA3.1(-)-peb1A为前期构建。壳聚糖购自Sigma。HRP标记的羊抗鼠IgG、IgM购于北京博奥森生物技术有限公司。小鼠淋巴细胞分离液购自天津美德太平洋科技有限公司。小鼠 CD20、CD21单抗、羊抗鼠 IgGHRP、(FITC)mouse anti-rat IgG(H+L)均采购于美国eBioscience。空肠弯曲菌(编号：ATCC700819)标准株为全基因组测序菌株，血清型Pen2，购于美国典型培养物保藏中心。……