根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达*

潘力 王云艳 王斌 何攀 李俊星

(华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006)

黑曲霉(Aspergillus niger)是丝状真菌中的重要类群，具有高效的蛋白表达、分泌和修饰能力，被美国食品及药物管理局(FDA)认定为安全菌株，在食品、医药、饲料、工业酶制剂等领域正受到越来越多的关注［1-4］.在基因工程中，外源基因进入黑曲霉细胞后会整合在其染色体上，重组子具有很高的遗传稳定性［5］，有利于异源基因的高效表达，因此黑曲霉作为异源蛋白的重组表达系统日益受到重视.黑曲霉作为表达系统的关键技术是遗传转化方法的建立.根癌农杆菌介导的转化(ATMT)具有操作简便、重复性好等优点［6］，其效率远高于原生质体转化、电转化等传统方法［7］，已成功应用于丝状真菌的遗传转化［8-11］.目前，ATMT介导丝状真菌转化局限于基因功能研究［6］，钟耀华［12］曾利用 ATMT 转化瑞氏木霉分析其生长代谢突变子.然而，由于遗传筛选标记的限制，利用ATMT介导黑曲霉表达异源蛋白的研究鲜见报道.本研究以在轻工食品行业具有重要应用的米黑根毛霉脂肪酶(RML)为研究对象，在优化遗传筛选标记的基础上，采用根癌农杆菌介导RML表达载体转化无孢黑曲霉，并对转化子表达RML进行初步的发酵条件优化，以期为RML的大规模工业应用奠定基础.

1 材料与方法

1.1 菌种与质粒

无孢黑曲霉SH-1，华南理工大学生物科学与工程学院微生物实验室保藏;根癌农杆菌LBA4404，由广东省农科院惠赠.华南理工大学生物科学与工程学院……