兔病毒性出血症病毒的分离与鉴定

马 越

（甘肃省玉门市畜牧兽医局，玉门 735211）

兔瘟又称兔病毒性出血症（RHD），是兔的一种以全身性出血和多发性血管内凝血为主要症状的急性、败血性、病毒性传染病。可通过呼吸道、消化道、皮肤等多种途径传染，潜伏期48～72 h。RHDV属杯状病毒科兔病毒属，其核衣壳仅有一种相对分子质量60 000的主要结构蛋白（Vp60）组成。病毒粒子在电镜下呈球形，20面体对称结构。能凝集人的O型红血球，对绵羊红血球有轻度凝集，不凝集其他动物的红血球[2]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒

兔病毒性出血症病毒（RHDV），由甘肃农业大学兽医预防组提供。

1.1.2 试验动物

试验兔为甘肃省兰州市安宁区某农户家自养家兔，2个半月龄，未接种过疫苗，也未接触过感染源。

1.1.3 设备与试剂

离心机、混匀机、电镜、试管、烧杯、离心管、剪毛剪、5 ml注射器、手术刀、剪刀、灭菌棉、无菌手套、纱布、滤纸、镊子、照相机。生理盐水、双抗、PEG6000、NaCl、氯仿、PBS液。

1.2 方法

1.2.1 病料处理

将实验室病毒反复冻融3次，取2 ml装于离心管，标记为1号病毒，用于感染1号兔；然后再取8 ml组织研磨液4 ℃ 5 000 r/min 30 min，取上清2 ml，标记为2号病毒，用于感染2号兔。

1.2.2 动物接种

将2管RHDV分别接种2只敏感健康兔（2个半月龄家兔，未免疫，也未接触过病原），然后观察其临床症状及发病特征。

1.2.3 提取处理

1号兔于28 h左右死亡，2号兔约65 h左右死亡。将病死兔在实验室剖检，摘取有典型病变的内脏及器官，包括肝组织、脾组织、气管、肺组织、肾组织、心脏，然后加无菌生理盐水20 m1，研磨均匀后加入适量“双抗”，置4 ℃冰箱过夜，置-30 ℃冰箱保存备用。

1.2.4 病毒提纯

1.2.4 .1 取病死兔的保存组织研磨液，以0.005M PBS液（含0.15M NaCI，pH7.4）制成1：10（W：V）的悬液，-20 ℃冻融3次。……