结直肠癌CD133+细胞定量评估的意义

缪 刚 李 尧 赵艳阳 黄美雄 韦军民

越来越多的证据表明肿瘤中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells)，并且其与肿瘤的增殖、转移、复发和对化疗不敏感关系密切。CD133被确认为最好的独立结直肠癌干细胞标志物，并且可以通过对结直肠癌CD133+细胞表达来预测患者的生存期［1］。这说明CD133不但可以在筛选肿瘤干细胞以及靶向性或选择性杀伤肿瘤干细胞中发挥重要作用，还可以成为结直肠癌患者的一个重要预后指标。本研究取材于手术中切除的新鲜结直肠癌组织标本，提取具有活性的原代结直肠癌单细胞进行流式细胞分析。在准确定量评估后发现CD133+结直肠癌干细胞的表达与肿瘤增殖能力和肿瘤转移相关蛋白的表达相关。这为临床结直肠癌干细胞的准确定量检验提供了方法和依据。

材料与方法

1.肿瘤组织取材:结直肠癌组织直接来源于手术切取标本(术前经纤维结肠镜活检病理确认)。标本离体后迅速切开肠道，用0.9%生理盐水冲洗后切取肿瘤边缘约1cm×2cm大小非坏死组织。癌组织经5次清洗液(青霉素1mg/ml、卡那霉素0.5mg/ml、两性霉素2.5μg/ml的生理盐水)清洗后，存放入4℃保存液(5%FBS的DMEM，抗生素剂量同清洗液)备用。相关操作程序经北京医院伦理委员会审核通过。

2.原代结直肠癌细胞提取:肿瘤组织进入实验室无菌操作台。经细胞清洗液(Hanks液，抗生素剂量同前)清洗3次后将组织剪碎，然后用刀片将组织切至稠液状。将组织用9ml清洗液清洗收集入50m l离心管，加入1%collagenase 1ml (type I，Invitrogen corporation)后放入37℃培养箱震荡消化60min。消化后组织液经清洗离心，然后用60目筛网滤过后再次收集离心。……