线粒体途径在慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌凋亡中的作用

陈永青 郑 续 邵蒙蒙 王小同

目前，慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)已经不再单纯的被认为是一个肺脏疾病，还累及多个肺外器官，其肺外表现有骨骼肌功能障碍、体重减轻、骨质疏松症、心血管疾病等［1］。尤其是骨骼肌萎缩及体重减轻，在COPD患者的自然病程中普遍存在，近年来有关研究认为骨骼肌萎缩与COPD患者的病死率密切相关，Agusti等［2，3］在严重体重下降的COPD患者中发现骨骼肌细胞凋亡增加，导致骨骼肌纤维数量减少，从而引起骨骼肌萎缩，提示凋亡引起的细胞死亡也许是COPD骨骼肌萎缩的重要机制之一。本课题组前期研究已发现，慢性低氧高二氧化碳血症可导致小鼠骨骼肌凋亡指数明显升高，并出现肌纤维局部萎缩和线粒体部分损害，伴有炎症细胞浸润增多，提示凋亡可能参与了COPD引起的小鼠骨骼肌萎缩，炎症反应激活的死亡受体途径及线粒体途径可能参与了COPD引起的骨骼肌细胞凋亡［4］。本实验模拟COPD的发病机制，建立COPD模型，通过观察干预后的caspase－3的含量变化，进一步探讨凋亡是否参与了COPD导致的骨骼肌萎缩，同时观察实验组与正常对照组Cyt－C及细胞凋亡因子Bax、Bcl－2基因的表达情况，探讨线粒体途径在慢性低O2高CO2小鼠骨骼肌细胞凋亡中的作用及其可能的调节机制。

材料与方法

1.仪器与设备:动物实验复合模拟舱(潍坊华信氧业有限公司)、酶标仪(芬兰Thermo公司)、洗板机(芬兰Thermo公司)、LithtCycler480实时定量PCR仪(罗氏公司)。

2.实验动物及分组:成年storage protect feature(SPF)级雄性C57BL/6小鼠16只(由温州医学院实验动物中心提供)，体重20～30g，按随机数字表法分为实验组8只和正常对照组8只。……