肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段的克隆及原核表达

王云龙，刘小聪，李玉林，王国强，孙新城，董彩文，程 蕾，王继创，邓黎黎，李恒思

（1．新乡医学院，河南新乡450003；2．郑州职业技术学院，河南郑州450121；3．河南省生物工程技术研究中心，河南郑州450001）

肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段的克隆及原核表达

王云龙1，2，刘小聪1，李玉林3，王国强3，孙新城3，董彩文3，程 蕾3，王继创3，邓黎黎3，李恒思3

（1．新乡医学院，河南新乡450003；2．郑州职业技术学院，河南郑州450121；3．河南省生物工程技术研究中心，河南郑州450001）

根据GenBank公布的肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，Mp）P1蛋白羧基端序列（AF290001．1），设计合成2对特异性引物，采取套式PCR方法，以肺炎支原体培养物中提取的DNA为模板，扩增肺炎支原体P1蛋白羧基端基因序列，将其克隆至p ET32a表达载体，构建重组质粒p ET32a／P1（3 802～4 695），转化大肠埃希菌BL21－gold，测序验证后IPTG诱导表达，经SDS－PAGE表明重组蛋白表观分子质量与预期一致，可溶性表达产物经Western blot证实重组蛋白具有免疫反应性。

肺炎支原体；P1蛋白；套式PCR；原核表达

肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，Mp）是引起人类原发性肺炎的常见病原体之一。Mp感染广泛存在，寒冷季节发病率较高，每4年～5年可引起一次地区性暴发流行［1］。Mp感染以儿童多见，据文献报道我国Mp感染率在流行高峰期可达33%～38%［2－4］。除呼吸道急性感染症状外，亦可诱发哮喘、阻塞性肺疾病的急性发作及导致心血管、血液、中枢神经等多系统损害［5－6］，临床表现缺乏特异性，不利于诊断。因此，建立早期、快速的诊断方法对指导临床治疗有重要意义。

Mp感染的免疫学发病机制研究显示，位于黏附细胞器顶端表面的P1黏附蛋白是其主要功能结构，含有多个抗原决定簇，可激发机体的免疫反应［7］。……