不同地域阪崎肠杆菌基因型的研究和亲缘分析

刘培，张霞，曲鹏，吴冬雪，赵良娟，张海英，高旗利，张宏伟，郑文杰

（天津出入境检验检疫局，天津300461）

本研究共采用来自10 个不同国家样品中分离出来的阪崎肠杆菌菌株34 株，利用Riboprinter 系统对这34 株阪崎肠杆菌进行基因鉴定，应用BioNumerics 软件对不同来源地菌株的基因分型结果进行对比研究，做出阪崎肠杆菌同一地域和不同地域菌株的亲缘图谱。对不同地域的阪崎肠杆菌的亲缘关系进行分析。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

34 株试验菌株（见表1）；改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）；阪崎肠杆菌检测显色培养基；营养肉汤；营养琼脂；VITEK GNI 检测试剂；Riboprinter 试剂盒。

1.2 主要仪器与设备

Riboprinter 系统：美国杜邦公司；VITEK32 全自动微生物鉴定系统：法国生物梅里埃；BioNumerics 数据库软件5.0：APPLIED MATHS 公司；常规培养法必备的仪器设备和器具。

表1 试验菌株Table 1 Bacterial strains for detection

1.3 方法

1.3.1 目标菌生化鉴定

根据GB/T 4789.40-2008《阪崎肠杆菌检验》对试验用34 株目标菌进行增菌培养，在阪崎肠杆菌显色培养基上挑取蓝绿色菌落，接种营养琼脂，挑取营养琼脂上的菌落进行生化鉴定。生化鉴定选用VITEK32 全自动微生物鉴定系统。生化鉴定结果为试验用34 株目标菌全部为阪崎肠杆菌。

1.3.2 目标菌16SrDNA 序列分析

根据《GB/T 4789.40-2008 阪崎肠杆菌检验》对试验用34 株目标菌进行增菌培养，在阪崎肠杆菌显色培养基上挑取蓝绿色菌落，接种营养琼脂，挑取营养琼脂上的菌落进行基因鉴定。利用Riboprinter 系统对上述目标菌进行16SrDNA 序列分析。

加热元件通常为钼带或钼丝，钼带虽然使用寿命长，可靠性高，但制造成本高。……