人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达*

许秀芳， 辛 毅， 汪劲松， 赵莉敏， 杜兰萍， 葛桂玲，李 娜， 张 颖， 王世强， 黄益民， 罗 毅

(首都医科大学附属北京安贞医院，北京市心肺血管疾病研究所1细胞与分子生物学研究室，3实验中心，北京100029;2首都医科大学附属北京儿童医院心外科，北京100045;4北京放射医学研究所，北京100850;5北京大学生命科学学院，北京100871;6北京中医药大学电镜室，北京100029)

肌球蛋白轻链2v(myosin light chain 2v，MLC2v)的表达在胚胎心脏发育形成过程中起很重要的作用，MLC2v表达的异常改变将导致心脏缺陷，例如人类心肌病与MLC2v的点突变相关。无论在胚胎发育和出生后的婴儿发育或成熟期，MLC2v都具有心脏高度特异性。MLC2v基因的启动子(myosin light chain 2v gene promoter，pMLC2v)是3 kb 的片段，心脏特异性序列位于250 bp内，接近于TATA box［1］。有报道利用心室肌特异的MLC－2v启动子驱动EGFP，研究了大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)分化心室肌细胞的过程，不仅证明转染pMLC2v-EGFP并不影响大鼠MSCs的生长和向心室肌样细胞分化的能力，还证明EGFP在MLC－2v启动子驱动下能特异、有效标记大鼠骨髓MSCs来源心室肌样活细胞［2］。为了寻找一种能够示踪人MSCs分化为心肌细胞的特异性报告基因，本研究拟构建的心肌肌球蛋白轻链2v启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)和萤光素酶(luciferase，Luc)报告基因慢病毒载体［3-6］，转染人心肌细胞系(human cardiomyocyte cell line，HCM)和人肺癌细胞系A549，观察2种细胞中报告基因的整合表达特征，以及pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc是否具有心肌细胞特异性，为利用多个报告基因同步示踪实验动物活体内人MSCs的归巢、迁移和分化等多个生命特征奠定基础。

材料和方法

1 材料

1.1 主要试剂 高糖DMEM培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、青霉素和链霉素均购自Gibco。……