自噬在晚期糖基化终产物诱导的内皮细胞凋亡中的作用*

胡鹏飞， 赖东武， 何 红

(浙江大学医学院附属邵逸夫医院心内科，浙江杭州310016)

晚期糖基化终产物(advanced glycation end products，AGEs)是非酶糖化反应的终末期产物，正常人随着年龄的增加，AGEs会缓慢增加，但糖尿病病人由于长期高血糖状态，导致体内糖化反应及AGEs生成加速。已有多项研究表明AGEs是引起糖尿病血管并发症的重要诱因之一［1］。AGEs能够在糖尿病病人血管壁沉积，促进内皮细胞凋亡并增加其促凝活性，从而启动并加速动脉粥样硬化的形成［2］。自噬是一种溶酶体依赖的细胞内受损细胞器或代谢产物的降解过程，其作为细胞的防御保护机制，与细胞凋亡之间有密不可分的联系［3］。多项研究表明AGEs能诱导内皮细胞凋亡［4］，但关于AGEs与自噬之间可能存在的病理生理联系，目前尚不清楚。调节自噬的相关信号通路较多，其中，PI3K/Akt/mTOR信号通路是一条重要的自噬相关信号通路。本研究以自噬相关蛋白LC3－II的表达作为衡量自噬水平的主要指标，初步研究AGEs诱导内皮细胞自噬的相关机制及其在AGEs诱导内皮细胞凋亡中的作用。为临床上保护血管内皮细胞，防治糖尿病合并动脉粥样硬化开辟新的途径。

材料和方法

1 材料

人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)购自上海中科院细胞研究所;抗LC3－Ⅱ多克隆抗体购自Novus;蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)多克隆抗体、磷酸化蛋白激酶B(phospho－protein kinase B，p－Akt)多克隆抗体、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)多克隆抗体和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phospho－mammalian target of rapamycin，p－mTOR)多克隆抗体均购自Cell Signaling;DMEM培养基购自Gibco;胎牛血清购自四季青公司;内毒素凋亡试……