Aβ25-35体外诱导海马神经元及石菖蒲、远志有效成分合用对其SOD、MDA的影响*

文 雯 王 玉

（浙江中医药大学生物工程学院，浙江 杭州 310053）

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是发生于老年和老年前期以各种疾病引起的进行性、持续性高级神经功能的全面障碍，最终导致神经功能衰退的一组后天获得性综合征，是痴呆中最常见的一种［1］。为进一步探讨α-细辛醚和远志皂苷配伍的作用机制，本实验体外培养大鼠海马神经元，并用Aβ25-35体外诱导，建立了AD模型，检测用药前后海马神经元超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的变化。

1 资料与方法

1.1 试剂及药物 胰蛋白酶、DMEM高糖培养基、Neurobasal培养液、B27补充物、青霉素、链霉素（Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青）；Aβ25-35、多聚赖氨酸（Sigma）；L-谷氨酰胺（杭州宏博进口分装）；α-细辛醚标准品 （ALDRICH，2883-98-9）； 脑复康（石药集团中诺药业有限公司，批号：11100501）；远志皂苷标准品（上海源叶生物科技有限公司，100908A）；阿糖胞苷（上海华联制药厂）。

1.2 大鼠海马神经元的分离培养 取新生24 h内的SD大鼠（浙江省医学科学院提供），在无菌条件下分离出双侧海马，用0.25%胰蛋白酶消化 （37℃、20 min），加入含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基以终止消化，用巴斯德管将组织块轻轻吹散，制成密度为2×105个/cm2的单细胞悬液，接种于涂有多聚赖氨酸的6孔板上，置于37℃、5%CO2的培养箱内培养。1 d后细胞贴壁，全部吸弃DMEM培养液，换为完全培养基（Neurobasal培养液加2%B27补充物、0.5 mmol/L L-谷氨酰胺、1%青、链霉素组成）。以后每周换液2次，每次换半液。于培养第4日在培养液中加入阿糖胞苷终浓度为10 μmol/L作用48 h以抑制胶质细胞的过度生长。经免疫荧光鉴定，通过细胞计数器统计，90%以上的细胞为神经元。培养第10日的神经元用于实验。……