BMP-4基因单核苷酸多态性与腰椎后纵韧带骨化症关联性实验研究＊

赵伟光，刘振武，刘 利，谢延平，林 欣

（1.河北省邯郸市中心医院骨一科 056001；2.首都医科大学附属北京天坛医院骨科 100050）

后纵韧带骨化症（OPLL）是指因后纵韧带发生骨化，从而压迫相应节段的脊髓和（或）神经根，产生肢体的感觉和运动障碍及内脏植物神经功能紊乱的一种疾病。由于疾病的迟发特性，保守治疗不能阻止本病的发展，因此，了解OPLL的病因非常必要。据统计，脊柱OPLL 70%发生于颈椎，胸椎仅占15%，腰椎较少。目前大量研究证实该病与基因多态性存在明显相关性［1］，笔者已研究了骨形态发生蛋白-4（BMP-4）基因上4个单核苷酸多态性位点6 007C＞T（rs17563）、－5 826G＞A（rs1957860）、3 564C＞ T （rs2855532）和 IVS-160C ＞ T（rs2071047）与颈椎OPLL的关联性，证实了其中2个位点与颈椎OPLL的发生和发展存在相关性［2］。但在腰椎OPLL患者中是否也存在相似关联性，目前国内、外尚无有关报道，本研究首次对BMP-4基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）、与腰椎OPLL关系进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 所有入选者皆拍摄腰椎X线平片、CT及采集完整病史，由骨科专家组根据TsuyamaN的诊断标准［3］，将样本分为腰椎OPLL病例组和对照组。排除与OPLL有关的骨代谢疾病。病例组：男21例，女9例；年龄47～65岁，平均56.7岁；对照组：男19例，女11例；年龄51～70岁，平均60.3岁。收集入选者周围静脉血4mL，EDTA-K2抗凝。样本进行随机混合编号。

1.2 主要仪器及试剂 Wizard Genomic DNA Purification Kit购自美国Promega公司，dNTP及

耐热性DNA酶购自日本TaKaRa公司，引物由北京三博远志生物有限责任公司合成。ABI 3730XL DNA测序仪、PCR仪 MYCYCLER（美国BIORaD公司）、SIGMA低温高速离心机、凝胶成像系统Biospectrum。

1.3 方法

1.3.1 DNA的提取 利用DNA提取试剂盒进行人血白细胞基因组DNA提取。提取的DNA样品经0.8%琼脂糖凝胶电泳测定，A260／A280紫外定量，确定每个样本已提取DNA成功。……