谢湘竹,赵水平,于碧莲,钟巧青
目前认为,炎性反应参与了动脉粥样硬化的发生发展过程[1]。脂肪细胞和脂肪组织不仅参与脂质和能量代谢,而且还参与了炎性反应,两者在动脉粥样硬化形成过程中的作用极其重要。氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)具有致动脉粥样硬化作用,还在局部慢性炎性反应中起一定的作用[2]。他汀类药物具有独立于降胆固醇以外的多效性作用[3-5]。本文旨在研究阿托伐他汀对oxLDL刺激状态下脂肪细胞炎性因子表达的影响,并探讨其可能的作用机制。
1.1 材料 3T3-L1前脂肪细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院,高糖DMEM培养基购自美国Sigma公司,胰蛋白酶购自美国Gibco公司,胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司,胰岛素、地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、oxLDL购自美国Sigma公司,阿托伐他汀原粉由北京红惠制药公司馈赠,TRIzol购自美国Invitrogen公司,逆转录试剂盒购自美国Promega公司,引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成,核因子-κB(NF-κB)活性检测试剂盒购自Active Motif公司。
1.2 方法
1.2.1 3T3-L1前脂肪细胞培养、诱导分化与鉴定:根据3T3-L1前脂肪细胞培养和诱导分化方案[6],用完全培养基(高糖DMEM+10%胎牛血清)在37℃、5%CO2培养箱中培养细胞,2 d换液1次。待细胞生长至完全融合后2 d(第0天)时开始诱导分化,将培养液换成含0.5 mmol/L IBMX、0.25 μmol/L 地塞米松和10 mg/L胰岛素的完全促分化液。48 h后,撤去IBMX和地塞米松,换成只含有10 mg/L胰岛素的促分化液,2 d换液1次。至第9天,>95%的3T3-L1细胞分化成为成熟脂肪细胞,经油红O染色法鉴定,显微镜下脂肪细胞中脂滴呈亮红色。……