高效液相色谱法测定复方黄连胶囊中盐酸小檗碱含量

(浙江省金华市浦江县中医院中药房，浙江 金华 322200)

复方黄连胶囊是由黄连、白术等中药组方的复方制剂，用于治疗胃肠道疾病。黄连为方中君药，为有效控制制剂的质量，保证疗效，笔者建立了测定复方黄连胶囊中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪，DAD检测器(美国安捷伦科技有限公司);甲醇为色谱纯(美国B＆J公司)，娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯;盐酸小檗碱对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为110713－200208);复方黄连胶囊(市售品)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Zorbax XDB－C8(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:水(含0.34%磷酸二氢钾和0.34%十二烷基硫酸钠)－乙腈(53∶47);流速:1.0 mL/min;柱温:25℃;检测波长:345 nm;进样量:5 μL。在上述条件下，复方黄连胶囊中盐酸小檗碱与其他组分能达到基线分离(见图1)。盐酸小檗碱保留时间为10.5 min，理论板数以盐酸小檗碱色谱峰计应不低于2 000。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取盐酸小檗碱对照品约4 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，密塞、摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含盐酸小檗碱0.376 mg)。取复方黄连胶囊约50 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入酸性甲醇(每100 mL甲醇中加入 1.0 mL盐酸)15 mL，称定质量，放置 10 min，超声 40 min(40℃)，取出，擦干外部，放冷，再称定质量，补足减失的质量，摇匀，过膜(0.20 μm)，即得供试品溶液。取按处方和制备工艺制备的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察[1－2]

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL，分别置 1 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，密塞、摇匀，即得各质量浓度对照品溶液，进样5 μL。以峰面积为横坐标(X)、进样量(μg)为纵坐标(Y)进行线性回归，得回归方程为 Y=0.000 5 X－0.006，r=0.999 5(n=6)。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.188～1.129 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，依法连续进样5次。结果盐酸小檗碱峰面积的 RSD为0.26%(n=5)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，依法分别在 0，1，2，4，8，12 h时进样。结果盐酸小檗碱峰面积的 RSD为0.56%(n=6)，表明样品中盐酸小檗碱在12 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批次样品，精密称取5份，按供试品溶液的制备与含量测定方法依法制备与测定。结果样品中盐酸小檗碱的含量分别为 4.35% ，4.42% ，4.58% ，4.51% ，4.40% ，RSD 为1.12%(n=5)。

加样回收试验:取已知含量样品，添加相当于样品含量的80%，100%，120%的盐酸小檗碱对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下条件测定。结果3批样品中盐酸小檗碱的含量分别为4.41%，4.47% ，4.64% 。

3 讨论

黄连中主要含原小檗碱型生物碱，已分离出来的生物碱有盐酸小檗碱、巴马丁、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、木蓝碱等[3]，其中以盐酸小檗碱含量最高，达10%。控制盐酸小檗碱的含量，可从一定程度上控制提取物的质量。

在色谱条件研究中，对不同流动相及不同比例、不同流速等进行了考察，根据样品的分离度、保留时间等因素，确定了文中的最佳流动相。所建立的含量测定方法前处理简单，准确、稳定性好，可用于复方黄连胶囊的质量控制。

[1]张金渝，王 波，金 航，等.云南黄连不同部位有效成分及生物量的比较研究[J].中国中药杂志，2008，33(3):311－313.

[2]周国莉，林晓莲，程 聪.HPLC法测定复方黄连液中盐酸小桑碱的含量[J].中医药导报，2010，16(8):80－81.

[3]崔学军.黄连及其有效成分的药理研究进展[J].中国药师，2006，9(5):469－470.