青蒿素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞骨架蛋白F-actin的影响

王 莹 胡鹏超 宋 辉 李明梅 汤梦婕 杨 芳 魏 蕾

武汉大学基础医学院，武汉430071；1病理学与病理生理学系；2生理学系；3武汉大学中南医院肿瘤科，武汉430071

目的：青蒿素是从中药青篙中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物，是一种高效、速效的抗疟中草药物，并在肿瘤辅助治疗中具有免疫调节功能。本实验着重观察青蒿素对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及对细胞骨架蛋白F-actin的影响，并探讨其机制。方法：用RPMI-1640培养基在体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞：（1）按照约每孔1×104个细胞接种于96孔板，培养基中加入不同浓度的青蒿素（0.1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml、20μg／ml、40μg／ml、80μg／ml、100μg／ml、1 000μg／ml）和0.1%的二甲基亚砜（DMSO）作为对照，48h后加入10μl的噻唑蓝（MTT）（5mg／ml），孵育4h后加入100μl DMSO，在570nm酶标仪上测定吸光值。（2）将 MDA-MB-231细胞种在内置有玻片的24孔板内，加入不同浓度的青蒿素（1μg／ml、10μg／ml、50μg／ml）以及用0.1%的DMSO作为溶剂对照组，待细胞处理3h后，采用4%多聚甲醛固定10min，0.1%Triton X-100室温孵育15min，山羊血清室温孵育2h，避光条件下加入F-actin特异性染料phalloidin对F-actin进行着色，孵育40min后再用1μg／ml DAPI染色1min，0.01MPBS漂洗，在激光共聚焦显微镜下观察。结果：（1）MTT结果显示各种浓度青蒿素对MDA-MB-231细胞作用48h后，对该细胞的增殖没有显示出抑制或促进作用（P＞0.05）；（2）激光共聚焦显微镜观察显示，对照组细胞的F-actin主要环绕于细胞周边，形成周边肌动蛋白丝带，在细胞与细胞接触部位呈束状相互连接；而10μg／ml青蒿素作用的MDA-MB-231细胞可见细胞骨架F-actin出现重排，表现为外周致密带边缘毛糙不规整，出现环点状断裂，细胞中央有弥散actin，周边肌动蛋白丝带模糊变细，在细胞皮质区的F-actin纤维致密斑减少，细胞骨架明显受到干扰。结论：青蒿素对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖作用没有明显影响，但是能够抑制F-actin的聚集，破坏细胞骨架。提示青蒿素可能通过影响乳腺癌细胞MDA-MB-231的F-actin的聚集，影响肿瘤细胞的迁移能力。