HPLC法测定大鼠血浆中奥拉西坦的浓度Δ

刘秀菊，张志清，杨秀岭，杜杰，郭利（.河北医科大学第二医院，石家庄050000；.河北邢台市人民医院，河北邢台 05406）

奥拉西坦（Oxiracetam）化学名为4-羟基-2-酮-1-吡咯酰胺，是一种环γ-氨基丁酸（GABA）类促智药，可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺的合成，提高大脑对氧和葡萄糖的利用及三磷酸腺苷/二磷酸腺苷的比值（ATP/ADP），使大脑中蛋白质和核酸的合成增加；还能作用于谷氨酸盐促代谢受体，防止谷氨酸所致的神经毒性[1，2]。研究[3]显示，奥拉西坦可改善记忆与智能障碍患者的记忆和学习功能。已报道的奥拉西坦血药浓度测定方法，流动相制备复杂，血浆样品处理操作烦琐、成本高[4～8]。本研究拟建立大鼠血浆中奥拉西坦浓度的高效液相色谱检测方法，为奥拉西坦大鼠体内的药动学研究提供方法学参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

高效液相色谱系统，包括515泵、486紫外检测器、Empower Application操作平台（美国Waters公司）；GL-20G-Ⅱ冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；XW-80A涡旋混合器（上海医科大学仪器厂）；低温冰箱（日本三洋公司）。

1.2 试药

奥拉西坦对照品（石药集团中诺药业有限公司，批号:128101207，纯度:99.60%）；奥拉西坦注射液（广东世信药业有限公司，批号:1012010，规格:1 g∶5 mL）；乙腈为色谱纯。

1.3 动物

健康SD大鼠，清洁级，♂，体重（300±10）g，由河北省实验动物中心提供，合格证号为SCXK（冀）2008-1-003。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry shiedTMRP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相:乙腈-水（3.2∶96.8，V/V），流速:0.8 mL·min－1；检测波长:210 nm ；柱温:40 ℃；进样量:20 μL。

2.2 血浆样品处理

取冷冻血浆样品室温自然解冻，5 000 r·min－1离心5 min，取上清液200 μL置于带塞离心管中，加乙腈300 μL沉淀蛋白，涡旋振荡1 min，10 000 r·min－1离心5 min，取上清液20 μL进样分析。

2.3 专属性试验

奥拉西坦对照品溶液直接进样，另取空白血浆、空白血浆+奥拉西坦对照品及给药后2 h的血浆样品分别按“2.2”项下处理并测定，记录色谱。……