藻蓝蛋白酶解肽的分离纯化及其细胞毒活性

王雪青，邓 伟，杨进芳，毛羽聪，史中明

(天津市食品与生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津 300134)

藻蓝蛋白酶解肽的分离纯化及其细胞毒活性

王雪青，邓 伟，杨进芳，毛羽聪，史中明

(天津市食品与生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津 300134)

研究钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)藻蓝蛋白(C-phycocyanin，C-PC)及其胰蛋白酶水解肽的分离纯化。采用反复冻融和超声破碎法破碎细胞，用28～55g/100mL硫酸铵沉淀反复盐析获得纯度(A620nm/A280nm)为2.19的藻蓝蛋白，再通过羟基磷灰石(HA)柱层析和Sephacryl S-200 HR凝胶层析对其进行纯化，得到纯度(A620nm/A280nm)为3.89藻蓝蛋白。纯化后的藻蓝蛋白在40℃条件下经胰蛋白酶酶解60min后，用DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析对酶解肽产物进行分离，收集得到4组藻蓝蛋白酶解肽。采用MTT方法，研究藻蓝蛋白、酶解混合液、分离的4个酶解肽组分对肿瘤细胞系HeLa和293T增殖的影响。结果显示：肽组分1和4对HeLa细胞的抑制率分别为37.71%和47.04%，而混合肽和藻蓝蛋白抑制率分别为34.02%和26.03%，因此活性肽组分1和4显示出较好的肿瘤抑制效果，而这两种活性肽组分对正常细胞293T并无细胞毒活性，特别是组分4效果最明显，是极具开发潜力的保健产品。

藻蓝蛋白；纯化；酶解肽；细胞毒活性

藻蓝蛋白(C-phycocyanin，C-PC)是从螺旋藻等藻体中提取的一种光合辅助色素蛋白，无毒呈蓝色。许多研究报道，C-PC具有抗肿瘤[1-5]、抗辐射[6]、免疫调节[7]和保护神经[5,8]等生理作用，因此在西方发达国家，已作为添加剂广泛用于功能性食品和高级化妆品中。按照C-PC在特定波长吸光度的比(A620nm/A280nm)大小，将其分为食品级(A620nm/A280nm≥0.5)、化妆品级(A620nm/A280nm≥2.0)和试剂级(A620nm/A280nm≥4.5)3个级别。……