噬菌体基因Ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析

张大川，房国梁，李 琦，陈江源，王 岚，李 睿，刘烈炬，刘志国

(武汉工业学院生物与制药工程学院， 湖北 武汉 430023)

噬菌体基因Ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析

张大川，房国梁，李 琦，陈江源，王 岚，李 睿，刘烈炬，刘志国*

(武汉工业学院生物与制药工程学院， 湖北 武汉 430023)

目的：研究丝状噬菌体基因V蛋白(gene V protein，GVP)基因的合成、重组表达及其功能。方法：根据GVP的基因序列，选择大肠杆菌偏爱的密码子，设计合成了8个寡核苷酸片段，利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列，将其与原核表达载体pET-28a-c(＋)质粒重组，转化大肠杆菌，获得GVP蛋白阳性表达菌株，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达，产物经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化，获得目的蛋白GVP，DNA结合实验检测其功能。结果：成功合成出GVP基因，重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导获得高效表达，DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论：重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力，可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。

基因V蛋白(GVP)；大肠杆菌BL21(DE3)；重组；表达

丝状噬菌体多可感染含F因子的大肠杆菌，基因V蛋白(gene V protein，GVP)主要是由Ff组的M13、F1、fd等丝状噬菌体产生的一种非结构蛋白，由87个氨基酸残基组成，为噬菌体DNA复制所必需，可使噬菌体DNA移动至细菌的细胞膜，属于单链DNA结合蛋白，而且结合单链核苷酸与碱基序列无直接关系，该蛋白还可抑制翻译活性，在病毒、原核生物的DNA复制、翻译及遗传重组等过程中发挥重要作用[1-3]。

已有研究表明，利用GVP与单链DNA非特异性结合的特性，在核酸与蛋白质相互作用、病原微生物的核酸检测以及DNA测序等许多方面可有广泛应用，如利用某些单链DNA结合蛋白筛选生物标本或样品中单链核苷酸片段来研究某些外显子的特性等[4-6]。……