鞘内移植神经干细胞对慢性缩窄性损伤模型大鼠脊髓背角和背根神经节胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

张民皓，张红，胡玉萍，刘清珍，李伟伟，胡益民，李伟彦

0 引言

NSC作为一种神经组织特异性前体细胞，来源丰富，增殖、分化能力强，能整合于宿主细胞，易于基因修饰，极低或无免疫源性，无致瘤性等，是中枢神经系统基因治疗的理想载体［1］。NSC分泌的多种神经营养因子(neurotrophic factors，NF)对神经系统的生长发育和成熟有重要的影响，如神经元存活、轴突生长、突触可塑性和神经传递等，其中GDNF可能参与了神经损伤后修复过程并发挥重要作用［2］。有研究提示，移植到体内的NSC可以向病灶处迁移并促进中枢神经系统损伤动物的神经功能恢复［3］。一般治疗病理性疼痛方法很多，如某些药物［4-5］、补体活化途径［6］等，但通过移植NSC治疗神经病理性疼痛的研究还罕见报道。本研究通过观察鞘内移植NSC后坐骨神经CCI大鼠痛阈及脊髓背角、DRG GDNF的蛋白和mRNA表达变化，探讨NSC对大鼠神经病理性疼痛的作用。

1 材料与方法

1.1 NSC的制备、培养和鉴定出生1 d的SD乳鼠(由南京军区南京总医院比较医学科提供)按照无菌条件下取出全脑，眼科镊取海马，用胶头滴管吹打成细胞悬液，用DMEM/F12(1∶1)的无血清培养基［内含碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)20 μg/L，表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)20 μg/L，B27 20μl/L，L-谷氨酰胺2mmol/L，青霉素(1×105U/L)和链霉素1×105μg/ml］重悬细胞，置37℃、5%CO2孵育箱中培养。至第3代神经细胞球形成时，行神经上皮干细胞蛋白(Neuoepithelial Stem Cell Protein，Nestin)免疫荧光染色，同时用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液对神经细胞球进行诱导分化，然后以神经元和胶质细胞的特异性标记物神经丝微管蛋白(tubulin)及神经胶质酸性蛋白(GFAP)进行免疫细胞化学染色。……