海洋微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及性质研究

倪孟祥，马丽娜

(中国药科大学生命科学与技术学院微生物制药教研室，江苏 南京 210009)

糖尿病是严重威胁着人类健康的重大疾病之一，可分为Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病，其中Ⅱ型糖尿病占90％以上[1]。目前针对Ⅱ型糖尿病的口服降糖药主要有以下四类：磺酰脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂类及噻唑烷二酮类，其中α-葡萄糖苷酶抑制剂作为一类有效的口服降糖药受到广泛关注。

α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制人体小肠上皮绒毛膜刷状缘上α-葡萄糖苷酶的活性，减少食物中碳水化合物的消化，延缓葡萄糖的生成和吸收，从而达到降低餐后高血糖、减少其并发症发生的目的[2]。目前临床上使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖、伏格列波糖等)均采用化学与生物相结合的方法制备,价格昂贵且存在不良反应,因此微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂成为研究热点[3]。

作者在此建立了α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外筛选模型,并且从5株海洋极地放线菌和5株海洋极地细菌中筛选出6株具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的菌株，其中菌株N-1的抑制活性较强，并对菌株N-1进行了进一步研究。

1 实验

1.1 菌株及试剂

海洋极地放线菌5株(N-1、BM-22、BM-11、F-1-2、FM-5)及海洋极地细菌5株(T-2-2-1、T-1-3-Y2、T-1-1-2、T0-2-5、T0-2-1)，自行保存。其中菌株N-1初步鉴定为生金链霉菌[4]。

α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase，EC 3.2.1.20)、4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)，Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)；阿卡波糖，Bayer；其它试剂均为分析纯。

α-葡萄糖苷酶液：将α-葡萄糖苷酶冻干粉用pH值6.8的0.1 mol·L-1含0.2％ BSA的磷酸盐缓冲溶液配制成溶液，分装，-20 ℃保存。

底物：将PNPG用pH值6.8的0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲溶液配制成10 mmol·L-1的工作液，分装，-20 ℃保存。……