HTPP-MDC原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

卢雪梅，黄演婷，金小宝，汪 洁，朱家勇

(1.广东药学院 药用生物活性物质研究所,广东 广州 510006;2.广东省生物活性药物研究重点实验室,广东 广州 510006)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV) 主要在肝细胞内寄生和复制，导致急慢性乙型肝炎的发生，甚至引起肝硬化和肝癌[1]，目前临床上用于抗HBV的药物无组织和器官选择性，疗效不够理想。作者在前期研究中将肝靶向穿膜肽(Hepatocyte-targeting and penetrating peptide，HTPP)与家蝇抗菌肽天蚕素(Muscadomesticacecropin，MDC)融合，构建的肝靶向穿膜融合多肽 HTPP-MDC有望成为定位准确、高效结合、竞争性阻断和靶向杀伤的新型抗HBV药物，对降低乙型肝炎病毒感染引起的肝脏疾病的发病率和死亡率具有深远的意义。

但如何低成本、大量获得多肽类药物以满足其开发与应用的需求是科研工作者积极探索的课题。目前，多肽类药物的来源主要有以下几种：(1)直接从生物体分离纯化，由于数量太少且成本太高，作为应用开发几乎是不可能。(2)根据蛋白质的氨基酸序列，进行人工合成，也存在成本高、活性低等一系列问题[2]。(3)利用基因工程技术生产，该领域的飞速发展为低成本多肽类药物生产提供了一种可持续方案。通过基因重组技术，可大量高效地生产多种生物活性多肽如干扰素、生长因子等，在肿瘤、乙肝、神经系统疾病、创伤以及艾滋病等治疗领域得到了广泛应用[3]。

作者在此利用基因重组技术将目的基因亚克隆入原核表达载体pET32a(+)中，构建重组原核表达质粒，通过大肠杆菌表达，采用 SDS-PAGE 和 Western blot 对表达产物进行检测与鉴定，拟为HTPP-MDC的生物学活性研究及产业化开发奠定基础。……