一种新的角膜缘干细胞分选方法△

张 伟 杨为中 金 敏 高宗银 陈晓燕 许艳丽 张玉平

随着科学技术的发展，组织工程技术正在成为治疗组织、器官衰竭的有效方法和辅助手段。这标志着医学将走出器官移植的范畴，步入制造组织和器官的新时代，即再生医学的新时代。将种子细胞种植在支架上是构建组织工程产品的基本方法［1］。因此种子细胞在组织工程角膜中占据非常重要的地位。

我们以前报道了采用平板离心的方法［2］，以人角膜缘细胞系SDHCEC1为种子细胞构建了组织工程角膜上皮片。同时我们设计了一种利用平板离心方法短时间内形成纯细胞片的方法。实验中先用正交实验法优选出最佳离心参数，然后用多层叠加的方法快速构建出细胞片，对获得的纯细胞片中种子细胞的活性分析显示细胞活性明显高于传统方法。对于人角膜缘细胞系SDHCEC1，在离心转速为1800 r·min－1时有80%左右的细胞能够贴壁黏附，但当我们将这种方法应用于人角膜上皮组织块原代培养出的细胞时却发生了相反的变化，在同样的离心力下仅20%左右的细胞贴壁。为什么会产生这种现象呢?人角膜上皮组织块原代培养出的细胞中贴壁的细胞和不能贴壁的细胞有什么区别呢?本次我们通过细化平板离心转速分离出三群细胞，并对其特征性细胞标记的表达和增殖活性等进行了详细研究。

1 材料与方法

1.1 角膜缘上皮细胞完全培养基的配制 用DMEM无血清基础培养基(Gibco BRL)，添加胎牛血清(Gibco BRL)、hEGF重组人胰岛素(Gibco BRL)，人……