内毒素血症中肝细胞凋亡与Caspase-3蛋白表达的关系及阳离子A拮抗保护作用的研究

高 洪，屈常林，高利波，陈利平

(云南农业大学动物科技学院，云南 昆明 650201)

内毒素(Endotoxin，ET)是革兰氏阴性细菌生长或死亡裂解时释放的细胞壁脂多糖成分，其化学成份为脂多糖(LPS)。ET广泛存在于自然界，对食物、药物、试剂和溶液造成污染，进入机体后可以导致发热、血管扩张、血管通透性增加、中性粒细胞增多、补体激活、机体血压下降等病理生理反应，严重时可以导致弥散性血管内凝血及多器官衰竭，为严重威胁人、畜健康的致病因子。肝脏是机体清除ET的主要器官，也是ET损伤的主要靶器官。在哺乳动物细胞凋亡过程中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的激活起关键作用[1]。Caspase-3为引发细胞凋亡蛋白酶级联反应中的“核心”蛋白酶，可以作用于多种底物，其底物改变与细胞凋亡表型密切相关。研究表明Caspase-3在癌组织中的表达明显高于正常组织，ET可以提高硫胱醚-γ裂解酶(CSE)mRNA的转录水平及气体信号分子H2S生成率而造成肝损伤[2-3]。但Caspase-3在ET诱导的肝损伤中表达有何变化，起着何种作用等目前尚未见报道。本实验研究在内毒素血症中肝细胞凋亡与Caspase-3蛋白表达的关系及阳离子A(Cation A，CA)的保护效应，为进一步阐明ET致肝损伤的机制及抗ET药物的开发提供依据。

1 材料和方法

1.1 主要试剂及实验动物 LPS(E.coli，O111：B4)、碘化丙啶(PI)、多聚赖氨酸购自Sigma公司；CA购自美国Amresco公司；SABC法免疫组化检测试剂盒、Caspase-3兔多克隆抗体、Hoechst 33342购自武汉博士德生物公司；浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物公司；SD大鼠由昆明医学院实验动物科提供，体质量140 g/只～160g/只，雌(无孕)雄不限。……