雁鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

周 伟，李能章，魏学良，胡 娟，夏 天，王自力，彭远义

(西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400715)

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella mutocida)是引起禽霍乱、猪肺疫和牛出血性败血症的主要病原菌，有荚膜，革兰氏阴性。根据其生化特性分为多杀亚种、杀禽亚种和败血亚种[1]。由于P.mutocida不同血清型之间交叉免疫保护力较差，因此对病原鉴定时有必要鉴定其血清型。

2010年7月，重庆某养殖旅游山庄的一千多只40日龄雁鸭发生急性死亡，主要特点为发病急、死亡快，伴有腹泻的症状，3 d内死亡700多只。剖检病死雁鸭，心包膜增厚、心肌严重出血，肺出血，肝脏肿大、表面有灰白色小点，各段肠粘膜出血。本研究通过细菌分离培养，细菌16S rRNA序列比对，荚膜血清型鉴定，确定分离菌株为荚膜血清A型P.mutocida(编号CQ1)。该菌株毒力强，对氧氟沙星等药物敏感，在临床治疗中可以参考用药。

1 材料和方法

1.1 样本采集 对送检雁鸭进行病理解剖，无菌采取肺脏、肝脏和心脏做组织触片，革兰氏染色后镜检。

1.2 病原分离 无菌操作，剪开肺脏、肝脏、肾脏和心脏，用接种环蘸取切口内组织渗出液，分别接种马丁琼脂+10%马血清培养基、鲜血琼脂培养基和普通琼脂培养基，37℃培养18 h～24 h。观察菌落形态，挑取单菌落革兰氏染色后镜检，并做液体纯培养。

1.3 PCR扩增鉴定 利用BioTech试剂盒提取细菌基因组DNA，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成细菌16S rRNA通用引物[2-3]，P1：5'-AGA GTTTGATCCTGGCTCAG-3'， P2： 5'-AAGGAGGTG ATCCAGCCGCA-3'。同时参照文献[4]合成P.mutocidaA、B、D、E、F荚膜血清型特异性基因引物capA、capB、capD、capE、capF。PCR扩增采用25 μL体系，16S rRNA通用引物反应条件为：94℃5 min；……