H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定

张超林，刘春国，王寿山，石薇琳，李建辉，王 伟，刘彦云，刘 明*

(1.东北农业大学动物医学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

H5N1亚型高致病性禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)是引起禽流感暴发的主要病原，对养禽业造成了严重的经济损失。流感病毒粒子表面具有囊膜，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是病毒囊膜上的两种主要抗原，可以诱导禽类和哺乳动物产生免疫反应[1]。疫苗免疫是预防AIV感染的主要措施，目前使用的禽流感疫苗主要为传统的全病毒灭活疫苗及重组活载体疫苗[2-3]。

病毒样颗粒(Virus-like particles，VLPs)是新型流感疫苗研究的一种策略，与传统禽流感疫苗生产方法相比，该疫苗不依赖于传统的鸡胚生产系统，而采用体外细胞培养制备疫苗抗原；因其不含有病毒的基因组，因此具有更高的安全性；而且制备的VLPs与病毒粒子的天然构象相同或相似，有利于将表面糖蛋白呈递给免疫系统，从而诱导机体产生中和抗体[3]。本实验采用构建同时表达多个结构蛋白，对VLPs形成的影响进行探索，并进一步鉴定了流感VLPs的免疫原性和生物学活性，为研制新型流感亚单位疫苗奠定基础。

1 材料和方法

1.1 重组质粒和菌株 含有流感病毒A/Goose/QFY/2004(H5N1)HA基因和A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)M1基因重组质粒pHWQFY-HA和pHWPR-M1均由哈尔滨兽医研究所动物流感实验室构建。杆状病毒转移载体pFastBac Dual和pFastBac1，Sf9昆虫细胞，感受态细胞E.coliDH5α和DH10Bac由哈尔滨兽医研究所动物流感实验室保存。

1.2 主要试剂 ExTaq酶、T4 DNA连接酶和限制性内切酶均购自TaKaRa公司；……