蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析

赵大维，朱彦青，陈伟业，胡倩倩，殷倩倩，黄克和，步志高*

(1.南京农业大学动物医学学院，江苏 南京 210095；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；3.南京农业大学公共管理学院，江苏 南京 210095)

蓝舌病(Bluetongue，BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属的BT病毒（BTV)经虫媒传播引起的反刍动物的一种烈性传染病，病死率平均为30%，其中绵羊的病死率高达80%，给畜牧业造成严重损失。蓝舌病是OIE规定实时通报疫病。

BT迄今已发现有25种血清型[1]，其基因组含有10个双股RNA节段(dsRNA)，这10个dsRNA节段包裹于双层蛋白质衣壳内，编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3和NS3A)，7种结构蛋白的4种形成双层蛋白衣壳，内壳主要由VP3和VP7构成[2]，而外壳主要由基因片段L2和M5编码的VP2和VP5构成，约为病毒总蛋白的40%。VP2是病毒群特异性抗原和血凝素蛋白，诱导产生中和抗体，裂解VP2会使病毒丧失血凝活性，VP5也可能与中和抗体的产生和病毒毒力有关[3]。王健伟等通过在昆虫细胞中表达VP2和VP5蛋白及其特性研究表明，VP5可以增强VP2诱导中和抗体的能力，可以用于病毒样颗粒的装配和基因工程疫苗研究[4]。本研究利用原核表达载体pMAL-c2X系统表达了外壳蛋白VP5，对其免疫学特性进行了初步研究。

1 材料和方法

1.1 病毒株、质粒和载体 12型BTV由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人畜共患病吴东来研究员惠赠；Topl0、TB1大肠埃希氏菌株、BHK-21细胞及pMAL-c2X载体均由本实验室保存；BTV VP5血清样品由表达BT VP5蛋白的重组小反刍兽疫病毒(rPPRV-VP5)免疫5只山羊制备(分别采取免疫前血清和免疫后3周的血清)，其中rPPRV-VP5为本实验室采用反向遗传技术救获的重组病毒。……