鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立

赵 妍，孔聪聪，张晓敏，崔红玉，石星明，赵晓岩，薛 美，胡顺磊，闫 帅，牛秀杰，李巧玲，王 玫，王云峰*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；2.云南农业大学预防兽医系，云南 昆明 650201)

鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)是由ILT病毒(ILTV)引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病[1-2]。ILTV属疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科，在分类学上属于禽疱疹病毒I型。病毒基因组为155 kb的双股线性DNA分子，由一个长独特区(UL)和一个短独特区(US)，以及US区两侧的反向重复序列(IRs和TRs)组成。

自从2009年以来，感染ILTV的鸡大多出现急性死亡，并突破了以往的发病季节规律性，引起了养禽相关业内人士的高度重视。因此，对该病的早期确诊就显得尤为重要。

常规检测ILTV的方法有病原分离鉴定、血清中和试验和酶联免疫吸附试验等，这些方法虽然经典，但费时费力。随着分子生物学技术的发展，PCR，尤其是实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术以其快速、灵敏、特异性强等优点在病原体检测和定性、定量分析等方面得到了广泛的应用[3-14]。

本研究利用TaqMan real-time PCR技术，经过反应条件的优化，建立的ILTV实时荧光定量PCR诊断方法更为快速、特异、敏感，适用于ILTV的早期临床检测和流行病学调查，对有效控制该病的发生及传播具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 病毒株 ILTV WG株为本实验室保存；鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、新城疫病毒(NDV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)由本所其他实验室提供。……