副溶血弧菌和溶藻弧菌双重PCR检测方法的建立与初步应用

刘 阳，孔繁德，徐淑菲，吴德峰，林 立

(1.厦门出入境检验检疫局，福建 厦门 361026；2.福建农林大学动物科学学院，福建 福州 350002)

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus，VP)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，VA)均属于弧菌科弧菌属，是通过食物、水传播的病原菌。VP和VA具有相似的生物学特性和同样的致病性，是引起腹泻和食物中毒的重要病原菌。

据报道VP的危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因VP引起食物中毒的报道[1-2]。VA是海产品中的优势菌种，近年来VA引起急性腹泻和食物中毒的病例日益增多。VA广泛分布于自然界，是海洋生物弧菌病中危害最大的病原菌之一，对水产养殖业造成严重的经济损失。世界各国食品卫生法规中均将该菌列入法定检测项目，一经发现禁止进口和出口[3-5]。为有效控制这两种病原的发生和扩散，准确即时的检测手段是预防该病及控制病原菌传播的关键。本研究利用双重PCR技术，参照GenBank中登录的VP和VA的toxR基因序列，设计两对针对VP和VA的特异性引物，建立同时快速检测这两种细菌的PCR方法，进一步完善这两种细菌的检测方法。

1 材料和方法

1.1 实验菌株 VP(编号1.2164)购自中国普通微生物保藏管理中心；VA(编号266)、霍乱弧菌(编号312)、麦氏弧菌(编号452)、沙门氏菌(编号猪肝27)、美人鱼弧菌(编号569)各一株，均由厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心动检实验室分离鉴定和保存。

1.2 主要试剂 细菌DNA提取试剂盒和PCR反应试剂盒均购自TaKaRa公司；DNA Marker购自天根生化科技(北京)有限公司。

1.3 引物设计与合……