链霉素抗性突变选育那西肽高产菌株

高自召

(浙江赐富医药有限公司，浙江绍兴 312030)

那西肽是一种含硫多肽类抗生素，英文名Nosiheptide，是一种比较理想的饲用抗生素换代品。那西肽最先由罗纳普朗克公司进行研究和试生产，但由于其产量低，成本太高而未能大规模推广。直到80年代，开始规模化生产。虽然之后通过育种及工艺优化工作的持续开展，其菌种水平有了很大的提高，但菌种产量尚存在很大的提升空间。那西肽主要由活跃链霉菌(Streptomyces actuosus)、抗生素链霉(S.antibiotics)和青灰色链霉菌(S.glaucogriseus)产生，其中以活跃链霉菌为最好［1］。在此，对那西肽产生菌出发菌株N106的孢子进行抗链霉素致死剂量测定，采用紫外对出发菌株孢子进行诱变处理，使诱变孢子的DNA产生高频率突变，然后将突变的孢子涂布在含有链霉素最低抑制浓度的培养基平板上进行培养，获得链霉素抗性基因(str)突变高产菌株 NUS146、NUS182。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 那西肽产生菌N106菌株，本室保存。

1.1.2 培养基 斜面和平板培养基:可溶性淀粉、牛肉膏、硫酸铵、硫酸镁、磷酸氢二钾等，pH 7.2～7.4，去离子水配制。种子培养基:淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、硫酸铵等，pH 7.2 ～7.4，饮用水配制。发酵培养基:淀粉、黄豆饼粉、硝酸钠、硫酸镁等，pH 7.0 ～7.5，饮用水配制。

1.1.3 硫酸链霉素 大连医药集团大连制药厂。

1.1.4 原料和试剂 玉米浆、玉米粉、玉米淀粉、黄豆饼粉、酵母粉等均购自市场。可溶性淀粉(分析纯)、NaNO3(分析纯)、MgSO4(分析纯)、(NH4)2SO4(分析纯)、K2HPO4(分析纯)、N，N － 二甲基甲酰胺(分析纯)、乙醇(分析纯)等。

1.1.5 仪器 Waters高效液相色谱仪、生物效价测量仪、摇床等。

1.2 方法

1.2.1 制备单孢子悬液 取N106菌株新鲜斜面，用无菌水制成孢子悬液，脱脂棉过滤，收集单孢子悬液，用血球计数法计数，调整浓度为108/mL。……