HSP70-HBsAg基因修饰DC瘤苗抗肝癌作用的实验研究

幸思忠 薛冀苏 李鹤平 赖伏虎 黄呈辉 曾志荣 杨建勇 龙健婷

肝癌为我国常见恶性肿瘤之一，我国每年约有11万人死于肝癌，且发病率有上升趋势。肝癌的免疫治疗是医学领域研究的热门课题。在我国，肝癌的发生与HBV感染密切相关，相关研究已经发现肝癌患者血清乙肝表面抗原（HBsAg）检出率高达90%以上，提示HBsAg是肝癌的重要相关抗原之一。我们以往研究发现，HBsAg修饰的树突状细胞（DC）瘤苗对肝癌荷瘤小鼠产生有较明显的免疫治疗作用，同时能够诱导机体产生一定的抗肝癌免疫保护作用。但这种特异性的CTL效应还不够理想，如何提高DC提呈抗原能力，成为进一步诱导的特异性CTL的关键。已有研究发现热休克蛋白-70(HSP70)参与抗原提呈加工、协同免疫及自身免疫，可能是一种理想的疫苗增效剂［1］。本研究以HepG222.1.5肝癌细胞负荷小鼠模型，通过HSP70-HBsAg嵌合基因的重组腺病毒载体（Ad-HSP70-HBsAg）的介导，探讨HSP70-HBsAg嵌合基因修饰DC瘤苗对肝癌动物模型的免疫治疗效果，以期为HSP70-HBsAg嵌合基因修饰DC瘤苗治疗肝癌提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物和细胞株

C57BL／6J小鼠，雌性，6～8周龄，购自中山大学实验动物中心。HepG222.1.5细胞系为整合HBV基因的肝癌细胞系，能够稳定表达HBsAg和分泌HBV DNA，由南方医科大学附属南方医院感染科惠赠。

1.2 主要试剂

重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重组小鼠白介素-4（rmIL-4）、重组小鼠白介素-2（rmIL-2）和重组小鼠肿瘤坏死因子（rmTNF-α）购自深圳晶美公司。 RPMI 1640培养液、胎牛血清（FBS）、0.25%胰酶消化液和青霉素/链霉素购自Life Technologies公司。丝裂霉素C（Mitomycin C）、G418、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）、刀豆蛋白A(concanavalin, ConA)购自Sigma公司。……