土贝母皂苷Ⅱ对诱导性肝癌大鼠肝细胞周期的影响*

晁 旭 崔亚亚 成 晓 魏敏慧 党 琳 史海龙 杨新捷

（1.陕西中医学院基础医学院，陕西 咸阳 712046；2.西北大学生命科学学院，陕西 西安710069）

土贝母为葫芦科植物，是一种广泛应用的传统中药［1］，具有散结、消肿、解毒之功效［2］。采用现代提取工艺和分析方法已经从土贝母分离出14种皂苷，其中土贝母皂苷Ⅰ、Ⅱ被证明具有抗肿瘤，抗炎和提高免疫力的作用［3-4］。研究发现，土贝母皂苷Ⅱ是最有希望用于临床试验的化合物［5］。本研究应用流式细胞术（FCM）分析土贝母皂苷Ⅱ对癌前病变肝细胞DNA合成和细胞周期的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 Wistar大鼠，购于第四军医大学；二乙基亚硝胺（DEN）购自Sigma公司。土贝母皂苷Ⅱ由陕西中医学院中药教研室提供。

1.2 造模与给药 将大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，每组6只。对照组动物正常饲喂，模型组与治疗组于第1日按200 mg/kg体质量经腹腔一次性注射1%DEN，10 d后按2 mL/kg体质量第1次口服促癌剂（50%CCl4-橄榄油溶液），以后每隔3 d口服1次CCl4。实验第4周起，治疗组同时每日按200 mg/kg体质量灌服土贝母皂苷Ⅱ，共20 d。

1.3 标本采集与检测 （1）第16周取材进行肝细胞分离，按Seglen［6］改良法进行操作。大鼠经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，暴露肝脏，门静脉插管，在无菌条件下以恒温灌流泵先后灌注冲洗液和0.05%Ⅰ型胶原酶溶液各15 min。（2）收集对照组和实验组细胞，用磷酸盐缓冲液 （PBS）洗涤后，将细胞重悬于0.3 mL PBS，迅速注入预冷的75%乙醇，固定。测定时用PBS洗涤去掉乙醇，将细胞重悬于0.3 mL PBS中；加入0.6 mL碘化丙啶溶液，4℃避光染色15 min以上，经50 μm尼龙网过滤后，并以人末梢血淋巴细胞作为内参标准，用EPIC Scoulter流式细胞仪分析细胞DNA含量，并分析细胞周期。……