HPLC法测定小儿麻甘颗粒中黄芩苷的含量

徐瑞超，马云桐，，罗莉

小儿麻甘颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》[1]中药成方制剂第八册，标准编号WS3-B-1493-93，由麻黄、黄芩、甘草、紫苏子等8味中药组成，具平喘止咳、利咽祛痰之功效，用于小儿肺炎喘咳、咽喉炎症等病症。

原质量标准中无含量测定，有文献报道[2～3]测定小儿麻甘颗粒中盐酸麻黄碱的含量。黄芩具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎，降血压功效。黄芩含多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等，其中黄芩苷具有抗炎、镇静、降压等作用[4]。《中国药典》[5]2010年版一部中，黄芩药材及多种中药制剂收载有黄芩苷的含量测定项目，如儿童清肺丸、九味羌活丸、九味羌活颗粒、三九胃泰颗粒、三黄片、小儿百部止咳糖浆、小儿肝炎颗粒、小儿泻痢片、小儿热速清口服液、小儿清肺止咳片、小儿清肺化痰口服液、小儿感冒宁糖浆、小儿解表颗粒等。为了进一步加强产品质量的可控性，作者建立了HPLC法测定小儿麻甘颗粒中黄芩苷含量的方法。

1 仪器与试药

岛津SPD-20A液相色谱仪（LC-20AT），电子分析天平（德国赛多利斯公司BP2110），黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号200512），乙腈、甲醇为色谱级，其余试剂均为分析纯，小儿麻甘颗粒（四川巴中普瑞制药有限公司提供）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

芩的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

色谱柱：Kromasil C18（250×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（50︰50︰1）；检测波长：277 nm；流速：1.0 mL.min-1；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算均不低于3500。见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥 24 h的黄芩苷对照品3.14 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（0.0628 mg.mL-1）。精密量取对照品储备液1 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得每1 mL含黄芩苷6.28 μg的黄芩苷对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取约4 g小儿麻甘颗粒，精密称定，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50%的甲醇25 mL，密塞称定重量，超声处理（功率250 W；频率40 kHz）30 min，放冷，用50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，静置后精密量取上清液20 mL，置100 mL的量瓶中，加50% 的甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取小儿麻甘颗粒处方中除黄芩外的其它7味，按标准项下制备方法制得缺黄

2.3.1 线性关系考察 量取浓度为6.28 μg.mL-1的黄芩苷对照品溶液，置量瓶中，摇匀，即得对照品溶液，分别精密吸取2,4,8,12,16,20 μL，注入色谱仪，依法测定，以峰面积为纵坐标，黄芩苷的量为横坐标，作线性回归，得回归方程：y = 334331x –348.6，R² = 0.9998（n=7）。结果表明，样品进样量在0.0125～0.1256 μg内，黄芩苷峰面积值与进样量呈现良好的线性关系。见图2。

图2 标准曲线图

2.3.2 精密度试验 取黄芩苷对照品溶液（6.28 μg.mL-1），依法连续测定6次。结果峰面积的RSD为0.61%（n=6），表明仪器精密度符合要求。

2.3.3 重复性试验 取同一批（批号为100806）样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果黄芩苷的平均含量为6.644 mg.g-1，RSD为1.23%（n=6），表明方法重现性良好。

2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温密闭放置，分别于制备后0，2，4，8，12，24 h进样测定。结果黄芩苷峰面积的RSD为2.25%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 加样回收率试验 取已知含量的样品约2 g（批号为100806），共 9份，按供试品溶液制备方法制备溶液并定容至200 mL，各取1 mL，分别加入定量的对照品溶液（6.28 μg.mL-1）2.0、2.5、3.0 mL（约相当于样品量的80%、100%、120%）各3份，分别按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，测得平均回收率为99.89%，RSD为0.76%。结果见表1。

表1 小儿麻甘颗粒中黄芩苷回收率实验结果

2.4 小儿麻甘颗粒样品含量测定(批号为100806，100810，100812)

取3批小儿麻甘颗粒样品，按“2.1”项下色谱条件测定。结果3批样品中，黄芩苷含量分别为6.436，6.645，7.016 mg.g-1（n=3），与2010年版《中国药典》规定的黄芩药材中黄芩含量不得少于90%相吻合。

3 讨论

本文对小儿麻甘颗粒中黄芩苷的含量进行测定，通过色谱条件的考察和系统适用性实验，以及对照品和供试品的高效液相色谱图，显示上述色谱条件有很好的分离效果，使黄芩苷与其他成分达到了基线分离。此外，通过线性考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验等一系列方法学考察，证明本法简便、准确、快速、重复性好。因此，建议将该法作为小儿麻甘颗粒中黄芩苷的质量控制方法。

本试验比较了不同提取溶剂（如乙醇、甲醇等）、不同提取方法（如超声、回流、直接溶解过滤等）的提取效果，结果以70%乙醇直接溶解过滤提取的总体效果为佳，且操作简便、快速。在流动相系统的选择中，分别以甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸、乙腈-水-冰醋酸等不同体积分数、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱试验，结果以甲醇-水-冰醋酸（50︰50︰1）进行等度洗脱为佳，峰形对称且分离度较好，基线较平稳、不易漂移。

试验中还对Kromasil C18（250×4.6 mm，5μm）色谱柱及Diamonsil C18（150×4.6 mm，5μm）不同品牌型号的色谱柱进行比较，色谱行为基本一致，但是前者分离度较高。

[1] 卫生部药品标准[S].中药成方制剂.第八册,1993,23.

[2] 王启砚.HPLC法测定小儿麻甘颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J].中国药师,2008,11(8):994.

[3] 管玉云,程正.HPLC法测定小儿麻甘颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J].现代中药研究与实践,2007,21(5):32.

[4] 文敏,李雪.黄芩苷药理作用研究新进展[J].沈阳药科大学学报,2008,25(2):158.

[5] 国家药典委员会.中国药典.2010年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:282.