山梨酸对C2C12细胞增殖、IGF-1分泌和相关基因表达的影响

方心灵，王海峰，束 刚，王松波，朱晓彤，王丽娜，高 萍，江青艳

(华南农业大学动物科学学院，广东广州510642)

山梨酸(Sorbic acid，SA)，学名为2，4-己二烯酸，含有羧基和共轭双键等功能性基团，是一种不饱和直链脂肪酸(CH3C H ═ C HCH═CHCOOH).在饲料工业上，SA是一种重要的酸化剂和防霉剂，具有调节仔猪胃肠道微生物种群平衡、降低腹泻率、促进营养物质消化吸收、抑制饲料霉菌生长等作用［1］.另外，SA可通过β氧化的代谢途径为机体提供能量，且对动物机体无毒副作用［2-3］.华南农业大学动物科学学院生理生化实验室前期研究表明，日粮添加SA(0.05% ～0.40%)能够提高断奶仔猪的日增体质量和血液 IGF-1浓度，并且可能是通过促进肝细胞IGF-1的表达和分泌实现的［4］.此外，日粮中添加0.6%SA能够降低黄羽肉鸡胸肌和腿肌的失水率和pH1h［5］.然而，动物的生长性能和肉品质的提高与骨骼肌细胞的增殖及糖脂代谢水平的改变有密切关系.因此，本试验以C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞为模型，研究SA对C2C12细胞增殖、IGF-1分泌以及相关基因表达的影响，旨在深入揭示 SA的促生长机制.

1 材料与方法

1.1 试验细胞株和试剂

C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞株为华南农业大学动物科学学院生理生化实验室保存.

新生胎牛血清(GIBCO，美国);高糖DMEM和DMEM/F12(Hyclone，美国);胰岛素和山梨酸(Sigma，美国);MTT(北京鼎国);蛋白裂解抽提试剂和蛋白定量试剂盒(北京百泰克);Trizol(Invitrogen，美国);10×DNase I Buffer、DNase I(RNase-free)、Ribonuclease inhibitor和 Oligo d(T)-18 Primers(TaKaRa，日本);dNTP Mix(Fermentas，立陶宛);M-MLV Reverse Transcriptase(Promega，美国);Realtime PCR Master Mix(TOYOBO，日本);引物合成(北京奥科);IGF-1放免测定试剂盒(天津九鼎).

1.2 山梨酸对C2C12细胞增殖的影响

1.2.1 细胞生长标准曲线的绘制 用DMEM完全培养液……