体外分离子宫内膜干细胞3种方法的比较*

郭玉琪，赵潇丹，路 平，张 展

郑州大学第三附属医院妇产科郑州450052

目前，可以通过体外培养获得大量的子宫内膜干细胞，通过介入途径、局部种植和静脉途径等方法来治疗子宫内膜相关疾病［1］，特别是由于子宫内膜过薄、生长不良等原因导致的受精卵无法着床或子宫内膜容受性差等原因导致的不孕，为因子宫内膜相关原因不孕患者提供了一种新的治疗方法。虽然国内外研究者［2-3］已探索出多种分离子宫内膜干细胞的方法，然而，目前还未建立标准的体外分离、培养子宫内膜干细胞的方法，也未建立合适的体外培养条件。该研究旨在寻找一种比较简便、实用、高效的体外分离、培养子宫内膜干细胞的方法，为进一步从细胞和分子水平研究子宫内膜干细胞的各种功能及其干预调节奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 PBS 液(无 Ca2+、Mg2+)、2.5 g/L胰蛋白酶(上海泛柯生物科技有限公司)，胶原酶Ⅰ(美国Invitrogen公司)，胎牛血清(杭州四季青生物制品公司)，DMEM/F12培养基(美国Gibco公司)，青链霉素溶液(鲁抗制药厂生产)，台盼兰染色液、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、DAB显色试剂盒、CD90抗体和CD146抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.2 标本来源和处理 选取2010年3月至5月于郑州大学第三附属医院，因子宫肌瘤、子宫脱垂、原位宫颈癌等而进行子宫切除手术的患者，年龄31～49岁。术前3个月未使用过任何激素。术后立即取材，在子宫体后壁、距宫底1～2 cm处，无菌剃取子宫内膜组织并包括5 mm的子宫肌层。用PBS缓冲液进行冲洗，直到液体清亮。……