单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用

鞠 文，宋秀玲，原 野，张士尧，方 珍，徐 坤，李 娟，孟日增，3

（1.吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室，吉林 长春 130021；2.吉林大学军需科技学院食品质量与安全教研室，吉林 长春 130012；3.吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，吉林 长春 130062）

单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用

鞠 文1，宋秀玲1，原 野1，张士尧1，方 珍2，徐 坤1，李 娟1，孟日增1，3

（1.吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室，吉林 长春 130021；2.吉林大学军需科技学院食品质量与安全教研室，吉林 长春 130012；3.吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，吉林 长春 130062）

目的：制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌（LM）多克隆抗体，并初步探讨其在乳胶凝集试验（LAT）中的应用。方法：复苏并扩大培养LM标准菌株，制备灭活疫苗免疫家兔，采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价。4次免疫后，颈动脉采血分离血清，采用辛酸－饱和硫酸铵法粗分离，经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化，采用SDS－PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联，并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件，建立快速检测模拟样品中LM的方法。结果：制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364g·L－1，效价为1∶12 800～1∶25 600，与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应，与斯氏李斯特菌有弱交叉反应；致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40；利用LAT方法检测246份样品，阳性检出率为87.5%，最低检出抗原含量为0.039 8g·L－1。结论：制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体；……