Triton X-100对红细胞中抗去污剂膜蛋白拆离的影响

张敏妍 张 明

(1.中国人民解放军第四军医大学生物医学工程系 陕西 西安 710032；2.西安理工大学 陕西 西安 710048)

去污剂是一种能在水中形成微囊的双亲性小分子，这种微囊可以与脂双层发生相互作用形成磷脂和去污剂混合的微囊，或者是蛋白质、去污剂以及磷脂混合的微囊，它们是以磷脂—去污剂—蛋白质或者是去污剂—蛋白质混合物的形式存在于水溶液中[1]。非离子型去污剂Trtion X-100已经广泛地应用于不同的学科领域，人们对Trtion X-100与脂质、蛋白质之间的相互作用进行了研究，发现Trtion X-100促使了脂质混合物中脂筏结构的形成并且会诱使脂筏微区内的相态发生改变[2-3]。Trtion X-100作为阻断缓冲液时，它的疏水结构域的存在使得整合蛋白和膜的结合非常紧密，溶解下来的膜蛋白能够保持较强的活性，并且通过透析可以容易地除去去污剂，在脂筏拆离的实验[4]中它已经成为人们首选的非离子去污剂。我们对Triton X-100的浓度以及孵育液/膜溶液的体积比（Vi/Vm）进行了研究，得出了最佳的体积比、浓度。用原子力显微镜对蛋白含量最高组分进行了观察，鉴定出其蛋白质主要成分为脂筏蛋白。实验结果对于迅速、高效的分离脂筏蛋白质提供了一定的参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

血液样品由陕西省血液中心提供。Tris、TritonX-100、牛血清蛋白（BSA）购买于 Sigma公司，PMSF、考马斯亮蓝 G-250 购买于 Aldrich 公司，甘油、蔗糖、NaCl、NaH2PO4、Na2HPO4等其他试剂均为国产的分析纯。水为离子交换、二次蒸馏水。原子力显微镜，高速离心机，超速离心机，紫外分光光度计等。……