结核分枝杆菌Ag85A DNA 疫苗的免疫原性和治疗作用

梁 艳，吴雪琼，，张俊仙，阳幼荣，李忠明

结核病(tuberculosis，TB)一直是备受关注的一个全球性健康问题。据世界卫生组织估计，全球约有1/3 人口感染结核分枝杆菌(mycobacterium tuerculosis，Mtb)，全世界每年都有新发结核病例830万，死亡病例180 万［1］。我国患结核病人数位居世界第二，每年新增结核病患者约150 万，受感染人数约4.5 亿。结核病的疫情给结核病的防治提出了新的挑战，结核病的免疫治疗成为研究的热点之一，治疗性疫苗的研究与开发成为一个十分重要的研究方向。在前期研究中笔者以载体CMV blue 构建了结核分枝杆菌Ag 85A DNA 疫苗［2］，发现该疫苗对结核病具有一定的免疫治疗效果。鉴于载体CMV blue 不能用于人，而采用美国FDA 建议的可用于人的质粒载体pVAX1 重新构建了结核分枝杆菌Ag 85A DNA 疫苗。本研究通过动物实验评价pVAX1－Ag85A DNA 疫苗的免疫原性和对小鼠结核病的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 DNA 疫苗和菌株来源 质粒载体pVAX1和结核分枝杆菌Ag85A DNA 疫苗由上海海规生物科技有限公司纯化，浓度均为1 mg/ml，纯度较高(A260/A280 = 2.06 ＞1.80)，几乎不含蛋白和RNA。结核分枝杆菌标准株H37Rv 由中国药品生物制品检定所提供;微卡菌苗购自安徽龙科马生物制药有限责任公司，规格22.5 μg/支。

1.1.2 药物和实验动物 利福平胶囊购自沈阳红旗制药有限公司，规格0.15 g;80 只6 ～8 周龄雌性BALB/c 小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.1.3 试剂盒 ELISPOT 试剂盒购自BD 公司。

1.2 方法

1.2.1 DNA 疫苗的免疫原性

1.2.1.1 动物免疫分组 分为4 组，每组10 只小鼠。生理盐水组每只小鼠肌肉注射100 μl 生理盐水;pVAX1 载体组每只小鼠肌肉注射100 μg/100 μl pVAX1 载体;微卡菌苗组每只小鼠肌肉注射22.5 μg/100 μl 微卡菌苗;Ag85A DNA 疫苗组每只小鼠肌肉注射100 μg/100 μl Ag85A DNA 疫苗。……