盐酸法舒地尔对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和细胞色素C释放的影响

陈 胜，彭 沪，庄育刚，陈艳清，张翔宇

(同济大学附属第十人民医院急诊危重病科，上海 200072)

基础研究表明，细胞凋亡与脑缺血再灌注损伤有着密切的关系，凋亡是脑缺血再灌注损伤后神经元死亡的重要方式之一。最近研究发现，盐酸法舒地尔是一种新型Rho-激酶抑制剂(RKI)，可以有效预防和缓解脑血管痉挛，具有强大的扩血管作用和保护缺血脑组织的作用，但其是否具有减轻脑神经细胞凋亡的作用还未完全清楚。本实验旨在通过观察法舒地尔对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后大鼠海马CA1区神经细胞病理形态和线粒体超微结构改变，以及对细胞色素C(cytC)介导的线粒体凋亡通路中的关键蛋白cytC表达的影响，从细胞凋亡及其信号转导通路角度探讨法舒地尔对脑缺血再灌注损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

雄性健康SD大鼠72只，体质量250～300 g，由同济大学医学院实验动物中心提供。随机分成3组:假手术组(S组，n=32);缺血再灌注组(IR组，n=32);盐酸法舒地尔组(F组，n=24)。三组按再灌注时间再分为3个亚组，即缺血10 min后分别再灌注3、12、24 h，每个亚组动物均为8只。实验前3 d适应实验室环境，大鼠自由饮水和进食。

1.2 试剂

盐酸法舒地尔注射液(规格2 ml/30 mg)，由天津红日药业股份有限公司提供，cytC免疫组化试剂盒购自武汉博德生物公司。

1.3 模型制作

采用改良的四血管阻滞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型 。①称体质量，麻醉:10%水合氯醛0.35 ml/100 g腹腔注射麻醉待其四肢瘫软后取出。②分离或损毁椎动脉:将大鼠腹卧位固定于立体定位仪上，鼠头与躯干向前屈曲30°，颈后正中切口长约1 cm，暴露第一颈椎两侧横突翼小孔(椎动脉在入脑前从此孔下通过)。……