哮喘患者外周血转录因子Foxp3 mRNA表达水平及临床意义

西安市第一医院（西安710002） 谭 楠

支气管哮喘是由多种细胞和细胞因子参与的气道慢性炎症性疾病，其发病机制尚不完全清楚，T淋巴细胞在哮喘发生、发展过程中发挥重要作用。CD4＋CD25＋Treg细胞是新近发现的具有特异细胞膜表面分子和核转录因子的一类T细胞亚群，叉头翼状螺旋转录因子3（Foxp3）是Treg细胞的发育和功能维持中发挥重要作用的转录因子［1］。国内外研究证实哮喘患者体内，CD4＋CD25＋Treg细胞数量较正常人减少［2－4］，但有关Foxp3在哮喘中作用研究较少。本研究通过检测不同分期及不同疾病严重程度哮喘患者外周血中Foxp3 mRNA表达水平，初步探讨Foxp3在哮喘发病中的作用。

对象与方法

1 研究对象 选择2010年1～6月在我院住院的哮喘患者63例，男30例，女33例，平均年龄34．65±8．36岁。所有患者均符合2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制订的支气管哮喘防治指南中的诊断标准，并根据标准分为急性发作期36例（其中轻中度23例，重度13例），非急性发作期27例。正常对照组40例，男19例，女21例，平均年龄32．79±8．15岁，为我院健康体检者，均无过敏病史及家族史，近期无感染及其它疾病。

2 方 法 采集研究对象肘静脉肝素抗凝血5 ml，利用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，加入1 ml Trizol试剂裂解细胞，提取细胞总RNA，应用Fer mentas逆转录试剂盒合成的c DNA。根据文献［5］合成Foxp3及内参照GAPDH引物，具体引物序列如下：Foxp3 上 游 引 物 5＇－CTACGCCACGCTCATCCGCTGG－3＇，下游引物5＇－GTAGGGTTGGAACACCTGCTGGG－3＇，内参照 GAPDH 上游引物5＇－GCACCGTCAAGGCTGAGAAC－3＇，下 游 引 物 5＇－TGGTGAAGACGCCAGTGGA－3＇。20μl PCR 反应体系如下：10μl SYBRRPre mix Ex TaqTMⅡ（2×）、2μmol/L上、下游引物各2μl、6．0μl c DNA。采用两步法进行PCR扩增，其程序如下：95℃预变性30s，95℃5s、60℃30s 40个循环。扩增结束后利用Bio－Rad IQ520 Standar d Edition Optical Syste m Soft ware V2．0进行数据分析。……