黑根霉RN-M246催化甾体的11α-羟基化培养基研究

胡曦予，崔 励，冯 魁

(大连工业大学轻工与化学工程学院，辽宁 大连 116034)

甾体类药物是仅次于抗生素的第二大类药物，随着需求量的不断增大，其合成技术也得到了越来越广泛和深入的研究[1]。甾体类药物的传统化学合成方法步骤繁琐、副产品多、产率低且环境污染严重，而微生物转化技术具有专一性强、产率高、条件温和、污染少等诸多优点，而且其转化反应类型十分丰富[2]，因此越来越受到重视。

雄甾-4-烯-3,17-二酮(Androst-4-ene-3,17-dione，AD)是制造甾体激素类药物的关键中间体，常用于制备孕激素、雄激素、皮质激素、避孕药等[3]，在甾体母核引入羟基，可使其抗炎活性大大增强。其11α-羟基化获得的11α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮是制备治疗高血压及充血性心力衰竭的新型药物的关键中间体，且临床疗效优于其它同类药物[4]。

作者采用微生物转化法，以黑根霉(Rhizopusnigricans)RN-M246催化底物雄甾-4-烯-3，17-二酮进行11α-羟基化反应，优化了发酵培养基，以使其有利于菌体生长及转化，拟为11α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮的工业化生产奠定基础。

1 实验

1.1 菌株与试剂

黑根霉RN-M246，清华大学生命科学院。

雄甾-4-烯-3,17-二酮，Sigma公司；其余试剂均为市售分析纯。

1.2 培养基

斜面培养基：小米培养基，pH值自然。

发酵培养基(g·L-1)：葡萄糖30，玉米浆20，蚕蛹粉10，硫酸铵1，磷酸氢二钾5，pH值5.0。

1.3 方法

1.3.1 菌悬液的制备

黑根霉斜面中加适量无菌水，将孢子洗下，纱布过滤，充分振荡，制成1×107～1×108个·mL-1孢子悬液。

1.3.2 摇瓶转化

在500 mL挡板摇瓶中加入75 mL发酵培养基和10 mmol·L-1的底物，灭菌后超声，接入4%的菌悬液，在28 ℃、160 r·min-1条件下转化24 h，其后提高转速至220 r·min-1继续转化48 h。……