CHO细胞初始接种密度对细胞毒性试验结果的影响

管 莹，夭建华，高 茜，曾婉俐，黄海涛，李雪梅，缪明明

(云南烟草科学研究院，云南 昆明 650106)

体外细胞毒性试验作为一类重要的体外试验，在新药研发以及化学物质毒性评价方面均发挥着重要的作用。中性红比色法和噻唑蓝(MTT)比色法是目前应用较多的两种毒理学检测细胞毒性的方法，具有简便、快捷、灵敏等特点，广泛应用于评定食品、药品、化妆品对细胞的毒性作用[1～7]。

据报道[6～10]，由于使用的细胞种类不同，细胞毒性试验中适合的细胞初始接种密度存在较大差异。本实验室实际检测工作中发现，细胞毒性试验定量测定结果的变异较大，可比性较差，而细胞初始接种密度可能是影响定量测定结果的重要因素，但未见文献报道。鉴于此，为了提高中性红比色法和MTT比色法体外细胞毒性试验结果的半定量或定量检测的可靠性和可比性，作者就CHO细胞初始接种密度对中性红比色法和MTT比色法体外细胞毒性试验的影响进行了比较，旨在为运用中性红比色法和MTT比色法对化学品、食品等受试物的毒理学检测提供参考。

1 实验

1.1 材料、试剂和仪器

中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)，中国科学院昆明动物研究所。

DMEM/F12(Solarbo公司)，胎牛血清(美国Klark)，PBS，胰酶，中性红(Sigma公司)，二甲基亚砜(DMSO)。

96孔及24孔细胞培养板(Corning公司)，二氧化碳培养箱(Forma公司)，酶标仪(Bio-Rod公司)，Borgwaldt RM20/CS型半自动转盘式吸烟机。

1.2 受试物的制备

按国标方法[11]，利用半自动转盘式吸烟机抽吸40支标准测试用美国肯塔基卷烟3R4F，用直径92 mm的剑桥滤片捕集燃吸后产生的烟气总粒相物(TPM)；……