串珠素在咀嚼肌中的表达及意义

朱 莉，王彦亮，黄志锋，何 帅，周稚辉，麻健丰

(1温州医学院附属口腔医院，浙江温州 325027;2温州医学院药学院;3解放军第118医院)

细胞外机制(ECM)是由纤维性蛋白质、氨基多糖和蛋白聚糖等生物大分子组成的动态网络结构，在维持生物结构的完整性、细胞信号转导和细胞表型、功能的调节中均具有重要作用。串珠素是ECM中主要的蛋白聚糖成分，广泛存在多种组织基底膜和软骨基质中，与其他基质成分紧密结合并自行组成二聚体和其他的大聚合物。大量体外研究发现，串珠素在细胞生长和分化、组织化等方面发挥多种功能，可以通过调节生长因子的结合和活性，影响血管壁细胞、软骨和骨细胞等多种细胞在发育期的增殖、迁移，并影响细胞与基质的黏附，在机体心血管系统和软骨发育，血管、骨骼系统和神经肌接头(NMJ)的生成与功能调控等多种生命过程中均具有重要作用。2010年5月～2011年12月，我们对串珠素基因片段进行克隆、扩增和蛋白表达，以获取串珠素蛋白，并探讨其在咀嚼肌中的表达特点。

1 材料与方法

1.1 材料 探针载体直接转化，扩增，酶切，测序后，酶切片段，插入pET32a，表达，测序，表达全菌蛋白，Wetstern blot 1—测 his，Western blot 2—测抗串珠素，2次均在同一分子量处发现表达。牛串珠素基因(b串珠素)探针为Ray Rodgers教授(Reproductive Medicine Unit，Obstetrics ＆ Gynaecology，Adelaide University，SA，AUSTRALIA，5005)惠赠，全长183 bp，连接于pGEM-T Easy载体。

1.2 实验方法

1.2.1 目的基因扩增和鉴定 用b串珠素-pGEMT Easy质粒转化感受态大肠杆菌DH5α(质粒0.1 μg，DH5α 感受态菌200 μL，冰浴30 min后42 ℃热休克90 s，)，涂布于(含 Amp 100 μg/mL)的 LB 平板上，37℃培养过夜。挑阳性菌，将阳性细菌在含Amp的琼脂培养基中划板，挑取单克隆菌落接种于含Amp LB培养液中37℃振荡过夜。……