性发育异常患者的细胞分子遗传学分析*

滕奔琦，王青青，章 钧，李佩琼，郝秀兰，侯红瑛△

(1中山大学附属第三医院妇产科，广东 广州 510630;2广州医学院基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室，广东 广州 510182)

性发育异常是一种先天遗传性异常，通常表现为染色体、性腺和性解剖结构不典型，一般发病率为1‰～3‰，根据其定义性发育异常可分为3个类型:性染色体、46，XX 和46，XY 发育异常[1-2]，其发病机制不详。目前越来越多研究表明，性别的决定和分化，是由SRY(sex-determining region Y)基因主导，其它性别相关基因如编码转录因子的SOX9基因、DSS基因、DAX－1基因、NR5A1基因及编码细胞信号分子的WNT4基因、CYP21A2及CYP21A1P基因等多种基因共同参与和调控的复杂过程。本文分析了3例46，XX男性性反转综合征及1例女性假两性畸形患者的临床特点，并采用多重连接依赖的探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA)技术对患者 SRY、DSS、DAX1、WNT4、SOX9、NR5A1、CYP21A2等性别相关基因拷贝数进行筛查，最终采用荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridization，FISH)进行基因定位，对性发育异常患者进行了细胞及分子遗传学研究，从遗传学角度进一步分析性发育异常机制。

材料和方法

1 临床资料

选取2010年12月份至2011年4月份来我院就诊的3例男性性反转综合征患者，临床均表现为无精子症、不育;染色体核型分析均为46，XX。1例女性假两性畸形患者，由于其已死亡，故选择其父母作为先证者进行性别相关基因分析。

2 方法

2.1 MLPA检测与分析

2.1.1 MLPA检测 采用SALSA P185-B2试剂盒(购自MRC Holland)，SALSA试剂盒包括的探针包括:NR0B1、SRY、SOX9、DAX1、WNT4、NR5A1、CYP21A2、CYP21A1P及X、Y染色体特异性基因探针，有6个参考基因探针以检测不同的常染色体基因定位。MLPA操作过程按照说明书进行，50 ng DNA在98℃变性5 min，然后和SALSA探针混合物混匀;60℃杂交过夜后，用连接酶(Ligase-65)54℃连接15 min，再98℃孵育5 min终止反应，最后使用SALSA FAM PCR体系进行PCR扩增。……