银杏内酯B对CLP诱导脓毒症小鼠的保护作用*

王晓东，宋 兵，曾耀英△

(1暨南大学组织移植与免疫实验中心，广东 广州 510632;2广州医学院第三附属医院，广东 广州 510150)

脓毒症(sepsis)是感染导致的全身性炎症反应综合征，可继发感染性休克、多器官功能障碍综合征，是ICU(intensive care unit)病人死亡的主要原因[1]。在实验室环境下，对啮齿类动物进行盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture，CLP)诱导的多微生物脓毒症模型类似于肠穿孔和肠源性混合细菌感染的临床情况，因而能够模仿脓毒症病人的典型病理生理变化，是一种与临床情况有明显相似性的理想脓毒症模型，目前使用最为广泛，并被视为脓毒症研究的金标准[2－4]。近年来，血小板激活因子受体(platelet－activating factor receptor，PAFR)信号通路与炎症、感染等疾病的关系及其在固有免疫应答中的重要作用被特别关注[5－6]，而在前面的实验中，银杏内酯 B(ginkgolide B，BN52021，GB)作为 PAFR的强效拮抗剂充分体现了其可作为免疫调节药物的潜质[7－8]，于是本实验通过进一步研究探讨 GB对CLP诱导的脓毒症小鼠的存活、外周血一氧化氮(nitric oxide，NO)、活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)及细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF － α)、白细胞介素 1β(interleukin 1β，IL－1β)、IL－6和IL－10的影响来评价其对脓毒症小鼠的保护效果。

材料和方法

1 材料

清洁级BALB/c近交系小鼠 (雄性，8～10周龄，体重25～30 g)，购自广东省实验动物中心。GB和二甲基亚砜购自Sigma。Griess试剂盒购自Promega。H2DCFDA购自 Invitrogen－Molecular Probes。流式细胞微球阵列(cytometric bead array，CBA)试剂盒购自BD Pharmingen。FACSCalibur流式细胞仪为Becton Dickinson产品。

2 方法

2.1 CLP诱导的脓毒症小鼠模型的建立 取8～10周龄、雄性BALB/c小鼠(体重25～30 g)90只，每次30只，分为3组:sham组、CLP组和GB+CLP组，每组10只，分批进行手术。术前8 h禁食，自由饮水。术前称重，按体重(0.015 mL/g)腹腔注射2%水合氯醛溶液逐个麻醉实施手术。……