HLA－E在肝癌细胞系中的表达*

张 彤，曾宪成，李 华，陈文捷，方天翎，聂常富，陈规划△

(1中山大学附属第三医院肝移植中心，广东 广州 510630;2增城市人民医院普通外科，广东 广州 511300;3广州医学院第一附属医院肝胆外科，广东 广州 510120;4郑州大学附属肿瘤医院肝胆外科，河南 郑州 450003)

人类白细胞抗原E(human leukocyte antigen E，HLA－E)是功能和作用途径最为明确的主要非经典HLA－I类分子。Malmberg等[1]的一项研究显示，CD94/NKG2受体能通过上调HLA－E使肿瘤细胞免受细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte，CTL)介导的肿瘤杀伤作用，这可能构成了肿瘤免受CTL介导的免疫攻击的一个机制。据报道，HLA－E低表达于几乎所有成人细胞表面，是免疫细胞[自然杀伤(natural killer，NK)细胞或部分CTL亚群]抑制性CD94/NKG受体的主要配体[2，3]。非经典HLA－I分子的发现，及其特点和功能的进一步阐明，解释了为什么经典HLA－I分子“缺失”的癌细胞逃避了CTL“杀伤”的同时，也逃避了NK细胞的免疫监视。目前，HLA－E在肝癌细胞中表达的研究较少，本课题研究HLA－E在各种肝癌细胞系和胎肝细胞系中的表达情况，明确它在肝癌的肿瘤免疫逃避的功能和作用，为我们的后续研究提供研究基础。

材料和方法

1 材料

1.1 实验对象 人肝癌细胞系HepG2细胞(来源ATCC)、PLC细胞(来源 ATCC)、Hep3B2.1－7细胞(来源 ATCC)、Bel7402细胞以及胎肝正常细胞系 L02细胞均购自中科院上海细胞生物研究所，MHCC97－H(高转移)细胞购于上海复旦大学肝癌研究所。

1.2 主要试剂 高糖DMEM粉剂(Gibco)，优级胎牛血清(PAA)，胎牛血清(HyClone)，新生牛血清(Gibco)，RNAprep培养细胞总 RNA提取试剂盒(北京天根)，SYBR Prime-ScriptTMRT －PCR Kit(TaKaRa)，PMSF(上海申能博彩)，细胞可溶性总蛋白裂解液(lysis buffer)(CST)，BCA蛋白定量试剂盒(深圳晶美生物公司)，小鼠抗人单抗HLA－E和小鼠抗人单抗GAPDH均购自Abcam，Western blotting试剂盒(Pierce)，HRP标记羊抗小鼠IgGⅡ抗(Pirece)。……