脑微血管内皮细胞与体外培养神经干细胞共培养后Th1/Th2相关细胞因子的表达

罗文芳 唐 涛 林 源 罗杰坤 钟鹏程 刘清娥

(中南大学湘雅医院中西医结合研究所，湖南 长沙 410008)

Th细胞是决定移植免疫排斥的关键成分，Th1细胞产生IFN－γ 和 IL－2 介导细胞免疫;Th2 细胞则产生 IL－4、IL－10 等，介导体液免疫。针对同种异体抗原的移植免疫应答主要是由Th1细胞介导。研究发现，在移植器官功能发生障碍之前，常检测到 IFN－γ、IL－2 基因表达增高〔1〕。侧脑室的脑室下带(Svz)和海马的颗粒下带(SGz)集中于血管周围，而且和内皮细胞间仅隔一层基板，这种解剖上的毗邻关系暗示了NScs和内皮细胞间存在密切的联系。本实验模拟内皮细胞与神经干细胞的体内环境建立共培养模型，观察Th1/Th2细胞相关细胞因子的变化，探讨同种异体内皮细胞与神经干细胞的免疫反应关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 新生3 d的Sprague－Dawley乳鼠6只，新生7～10 d Sprague－Dawley乳鼠20只，雌雄不拘，由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供。

1.1.2 主要试剂及药物 M199干粉培养基、D－Hank′s液干粉(Hyclone)，谷氨酰胺(上海伯奥)，肝素钠、明胶、台盼蓝、胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶(Sigma)，胎牛血清(杭州四季青)，DNaseⅠ(Roche)，多聚赖氨酸(武汉博士德)，bFGF、EGF(Pepro Tech EC)，抗Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体(美国PharMingen)，Trizo1试剂盒、DNA Marker、逆转录(RT)试剂盒、Pre Mix Taq(宝生物大连)，β－actin引物(上海生工)，一抗(Abcam)，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG、辣根酶标记链霉亲和素、浓缩DAB试剂盒(北京中山)，其他常用试剂为国产分析纯产品。

1.1.3 主要仪器 OLYMPUS IXTO倒置显微镜(日本OLYMPUS)，QWJ300TVBB型CO2培养箱(美国产)，Sanyo超低温冰箱(日本三洋)，ELX800酶标仪(美国产)，超净工作台(苏州净化)，E260 电子天平(梅特勒)，Beckman J2－21 型低温离心机(美国产)，Beckman DU－640紫外分光光度计……